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[结构和原理] percoll 分离小鼠肿瘤组织中淋巴细胞效果不佳

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 楼主| 发表于 2022-1-13 12:43:04 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请问percoll法富集的效果怎么样?
我先用9份percoll的原液和1份10XPBS配成工作液,然后再分别用70体积和30体积的1X PBS分别稀释工作液成30%和70%浓度的percoll。
离心管先加入70%的percoll,用30%的percoll去重悬细胞,缓慢加到70%的液体上面,比例为1:1。
离心1500转,20min,加速减速为1。
分离效果不加,细胞基本处于两种液体中间,试管底部没有细胞沉淀。想请教大家哪里有问题。

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发表于 2022-1-13 21:28:25 | 显示全部楼层
为啥不用Ficoll呢?

我记得Ficoll说明书里面有强调过不能用磷酸盐缓冲液,不知道Percoll的说明书是否有讲过类似的?

其次,有看到过有人用20-50-70的
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发表于 2022-1-21 09:34:19 | 显示全部楼层
分离效果不加,细胞基本处于两种液体中间,试管底部没有细胞沉淀。 ----- 中间这层就是TILs鸭,底部的是细胞碎片 & 红细胞,最上面是诸如肿瘤细胞之类的“大细胞”
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发表于 2022-1-26 08:43:39 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-1-13 21:28
为啥不用Ficoll呢?

我记得Ficoll说明书里面有强调过不能用磷酸盐缓冲液,不知道Percoll的说明书是否有讲 ...

倪老师,我也遇到类似的情况。我是用的40%/80%分离小肠上皮内淋巴细胞,淋巴细胞聚集在中间层,但粘连有红细胞。而且回收离心后,根本看不到细胞沉淀,是细胞丢失了吗?困惑。我用的角转子离心机,800g离心10min 回收的细胞,难道应该用水平转子离心机?
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发表于 2022-1-27 09:20:13 | 显示全部楼层
hnsyryx 发表于 2022-1-26 08:43
倪老师,我也遇到类似的情况。我是用的40%/80%分离小肠上皮内淋巴细胞,淋巴细胞聚集在中间层,但粘连有 ...

Ficoll会不会容易一些?
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