请问混合培养的两种细胞可以使用同一荧光通道吗？

jq2560775 · 发表于 2022-9-19 12:24:06

在混合淋巴细胞培养中，刺激细胞（DC）本身带有GFP荧光，请问反应细胞里的标志物（T细胞）可以再选择FITC通道的荧光吗？

我现在是觉得可以通过FSC/SSC再加上表面标志圈门，可以很明显得把两种细胞区分开来，应该可以使用相同通道的荧光？
希望大家能帮忙指点一下

niwanmao · 发表于 2022-9-19 12:37:43

分出两群细胞只是第一步，关键是如果用了同一通道的荧光素，如何衡量GFP+细胞的该抗原表达率呢？

jq2560775 · 发表于 2022-9-19 12:40:20

niwanmao 发表于 2022-9-19 12:37
分出两群细胞只是第一步，关键是如果用了同一通道的荧光素，如何衡量GFP+细胞的该抗原表达率呢？ ...

谢谢老师的回复，我现有的是FITC通道的CD25抗体，用来检测Treg，请问可以这样设计实验吗？

吹散的蒲公英 · 发表于 2022-9-19 15:27:29

jq2560775 发表于 2022-9-19 12:40
谢谢老师的回复，我现有的是FITC通道的CD25抗体，用来检测Treg，请问可以这样设计实验吗？ ...

不建议这样做，因为没办法确定CD25的阳性率，也们办法确定CD细胞的GFP阳性率。

niwanmao · 发表于 2022-9-19 18:32:16

jq2560775 发表于 2022-9-19 12:40
谢谢老师的回复，我现有的是FITC通道的CD25抗体，用来检测Treg，请问可以这样设计实验吗？ ...

光谱流式是能分开GFP和FITC的，但是常规流式，这两种荧光素被认为是一样的，如果FITC通道出现荧光，你认为是GFP发出的还是FITC的呢？

初出茅庐 · 发表于 2022-9-20 08:30:11

你的检测对象应该是T细胞，就是不关注刺激细胞的信息（不知道是不是这样？），我觉得你试试看，做一个不加CD25-FITC的空白管，就只有混合细胞，在FSC/SSC只圈淋巴细胞群，看是否会有FITC信号，要保证刺激细胞不干扰淋巴细胞。个人愚见

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