自噬检测方面的问题

simon911

请问MDC染色流式是看平均荧光强度吗？我也在做这个

niwanmao

simon911 发表于 2012-12-27 20:22

                               
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请问MDC染色流式是看平均荧光强度吗？我也在做这个

可以以阴性对照设置marker，然后计算其百分比（如下图）

MDC检测自噬

链接：http://www.nature.com/cdd/journal/v16/n7/full/cdd200946a.html

zdx0

simon911 发表于 2012-12-27 20:22

                               
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请问MDC染色流式是看平均荧光强度吗？我也在做这个

可以用平均荧光强度；
也可以划个范围搞个百分比（如倪老师C图）；（我是按这个做的。）
或者和阴性组对比，数数阳性细胞数（这种最好还是用LC3质粒来做比较好）。

simon911

zdx0 发表于 2012-12-30 11:22

                               
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可以用平均荧光强度；
也可以划个范围搞个百分比（如倪老师C图）；（我是按这个做的。）
或者和阴性组对 ...

这个流式我始终没有做出来 MDC的结果就是重复不了acridine orange的结果，您是用的FITC通道吗？ 但是我用荧光显微镜看的时候是用UV激发的 也就是常规看细胞核的那个镜头 不知道是不是因为激发波长的原因 所以流式细胞做不出来

niwanmao

simon911 发表于 2013-1-12 10:16

                               
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这个流式我始终没有做出来 MDC的结果就是重复不了acridine orange的结果，您是用的FITC通道吗？ 但是我用 ...

还是前面提到文章中：For quantification of monodansylcadaverine, MDC, staining, cells were incubated with 0.05 mM MDC at 37°C for 1 h, washed with PBS and acquired on an LSR II Becton Dickinson flow cytometer equipped with a 355 nm UV laser

355nm激发，512nm检测，所以属于FITC通道。不知道你们的荧光显微镜UV激发光属于多少nm？

zdx0

simon911 发表于 2013-1-12 10:16

                               
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这个流式我始终没有做出来 MDC的结果就是重复不了acridine orange的结果，您是用的FITC通道吗？ 但是我用 ...

荧光显微镜紫外激发，呈绿色荧光；流式的是用的FITC通道，488nm激发。

MDC染色时间可以长点，我之前做过40min和1h。可能是不好重复，我只做过两次，结合荧光显微镜照相的结果，之后我就没做了。

你如果用吖啶橙能做出结果也行啊。感觉染料做还是不太好，结合LC3质粒和WB结果吧。