多聚甲醛固定细胞后怎么保存时间长

chujindong

niwanmao 发表于 2011-11-2 22:46

                               
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从站友的测试结果看：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=redirect&goto=findpost&ptid=859&pid=1 ...

影响荧光抗体衰减的因素都包括什么？如果说温度和光线是主要因素的话，那么在原装的管子里，尚未取出使用时，抗体肯定是不衰减的。即使结合到细胞上之后，只要避光严格，温度合适，抗体就应该也不会衰减。当然这只是推论，我自己没有做过。我最长的放过两天，感觉比较可靠。也有测过之后保存7天以上的，能看到荧光，但是数值没有比较。

niwanmao

chujindong 发表于 2012-2-13 10:35

                               
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影响荧光抗体衰减的因素都包括什么？如果说温度和光线是主要因素的话，那么在原装的管子里，尚未取出使用 ...

你是指标记好抗体，用多聚甲醛固定完毕，放置2天和7天的你都做过？是做什么标记？

chujindong

niwanmao 发表于 2012-2-13 10:51

                               
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你是指标记好抗体，用多聚甲醛固定完毕，放置2天和7天的你都做过？是做什么标记？ ...

有好几种啊，FITC,PE,APC,PERCY-CY5.5.不过我不是说放七天都没有关系，我没有比较，荧光能看到是肯定的。

niwanmao

chujindong 发表于 2012-2-13 18:53

                               
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有好几种啊，FITC,PE,APC,PERCY-CY5.5.不过我不是说放七天都没有关系，我没有比较，荧光能看到是肯定的。 ...

如果有机会，可以测试荧光强度看，把经验分享一下。

zml

各位好，我是刚做流式的新手，想请教下，用多聚甲醛进行样品固定的时候，可不可以直接将样品浸泡在多聚甲醛里到上样前再洗涤后染色上样呢？
我做的样品时细菌，用的多聚甲醛的浓度是1%，实验的目的是想区分不完整的细菌和完整的细菌，染料时PI。请各位多多指教，谢谢了·

niwanmao

zml 发表于 2012-10-29 10:54

                               
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各位好，我是刚做流式的新手，想请教下，用多聚甲醛进行样品固定的时候，可不可以直接将样品浸泡在多聚甲醛 ...

多聚甲醛固定后，很难保证会不会对膜的通透性产生影响，建议还是直接现收现染PI吧。

zml

niwanmao 发表于 2012-10-29 13:09

                               
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多聚甲醛固定后，很难保证会不会对膜的通透性产生影响，建议还是直接现收现染PI吧。 ...

谢谢老师，但是我的样品不能及时处理，那用什么保存方式比较好呢？

niwanmao

zml 发表于 2012-10-29 14:14

                               
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谢谢老师，但是我的样品不能及时处理，那用什么保存方式比较好呢？

我建议：
首先比较一下固定之后与不固定之间是否存在差异，毕竟我没有做过细菌，以上只是从理论上推测。如果没有影响，那么就可以用多聚甲醛固定，如果有，尽可能想办法做新鲜标本。

zml

niwanmao 发表于 2012-10-29 15:29

                               
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我建议：
首先比较一下固定之后与不固定之间是否存在差异，毕竟我没有做过细菌，以上只是从理论上推测。 ...

好的，非常谢谢老师·

liuxin

niwanmao 发表于 2011-11-2 22:46

                               
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从站友的测试结果看：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=redirect&goto=findpost&ptid=859&pid=1 ...

倪老师，要是先家抗体孵育，后用加多聚甲醛固定方案的话，具体是怎么操作呢？
1.多聚甲醛固定多长时间之后用PBS洗一下，加PBS放4度，第二天直接检测；
2.还是直接加好多聚甲醛放4度，第二天PBS洗一下，上机检测？
3.Or 加好多聚甲醛放4度，第二天直接上机。