流式细胞术真能准确测细胞大小，不是Arbitary Unit那种，还可适用不同机型

niwanmao

细胞大小是反映细胞生理状态的重要指标，与细胞周期、分化、疾病进程等密切相关。传统流式细胞术通过前向散射（FSC）和侧向散射（SSC）信号间接估算细胞大小，但这些信号单位为Arbitary Unit，需频繁校准且无法跨实验设置比较。英国华威大学和莱斯特大学的研究团队近期在《Cytometry Part A》发表论文，提出一种单次校准结合数学转换的方法，成功将流式信号转换为绝对细胞直径（µm），并实现不同激光设置下数据的一致。  

实验设计
1. 构建线性模型  

• 细胞分选与库尔特计数器验证：使用HeLa细胞，通过流式分选将细胞按FSC/SSC的四个参数（宽度W、高度H）分为8个门，每个门收集至少30,000个细胞。分选后，用MoxiZ库尔特计数器精确测量各群体平均直径（表1）。
• 线性模型构建：以FSC.W、FSC.H、SSC.W、SSC.H为自变量，库尔特计数器测得的直径为因变量，构建多元线性回归模型 。剔除脉冲面积（因与W×H完全相关），模型在80%数据上训练，剩余20%验证，均方根误差（RMSE）为0.6 µm。
  

2. 不同激光设置的数学转换  

• 假设不同激光设置下的信号呈线性关系： 。通过匹配两设置的均值和标准差，求解系数\(ai\)和\(bi\)，将设置1的数据转换为设置2的等效值。转换后信号分布高度吻合，校准模型RMSE进一步降至0.16 µm。
  

关键结果：从群体均值到单细胞预测即可
1. 群体水平的高精度校准  

• 校准模型在匹配设置下预测群体平均直径的RMSE为0.6 µm，而跨设置直接预测误差显著增大（RMSE=2.08）。通过信号转换后，误差降至0.98 µm，证明转换有效性。
  

2. 单细胞尺寸预测  

• 模型可预测单细胞直径，匹配设置下RMSE为0.72–0.89 µm，跨设置转换后误差为0.92–1.10 µm。误差棒分析显示，模型能提供95%置信区间，满足科研需求。
  

方法评价  
1. 优势  

• 节省时间：仅需单次校准，避免重复操作。
• 跨平台兼容：适用于多数标准流式细胞仪，支持多参数（如荧光标记）与尺寸的同步分析。
• 数据可比性：不同实验室或实验设置的数据可通过转换直接比较，促进跨研究合作。
  

2. 注意事项  

• 细胞类型依赖性：校准需针对特定细胞类型（如HeLa），混合样本可能需更多分选门。
• 仪器线性范围：需确保散射信号与尺寸关系处于线性动态范围内。
  

参考文献：Davies P, Cavallaro M, Hebenstreit D. Single-Calibration Cell Size Measurement With Flow Cytometry. Cytometry Part A. 2025. doi:10.1002/cyto.a.24924.