求流式大佬指教！公司做的大鼠脾脏样本Th17细胞比例结果异常，CD3阳性分群不明显

叮咚叮咚买菜

司徒随风 发表于 2025-11-22 11:38
一个死活主群在10^4一个在10^3,这是同一个脾脏，我挺好奇他们是怎么做到的。难道是上机参数不一样吗，那这 ...

您好，我纯纯是流式小白，有什么离谱发言希望您别见怪。因为是同一个脾脏，分为两管分别测定Th17细胞比例和Treg细胞比例，所以我猜想这两管的上机参数可能不一样？
另外，请您指导我一下，由于第一行图片中展示的脾脏Th17细胞的死活和CD3+细胞分群不明显，我是否能够按照Treg死活主群的10^3直接区分不明显分群的Th17细胞的死活呢？

司徒随风

叮咚叮咚买菜 发表于 2025-11-23 22:52
您好，我纯纯是流式小白，有什么离谱发言希望您别见怪。因为是同一个脾脏，分为两管分别测定Th17细胞比例 ...

按您目前提供的信息看，大鼠脾脏样本Th17细胞应该是挂了，如果可以能不能分享一下FCS文件。

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wxd 发表于 2025-11-24 09:26
从你发上来的图片来看，这家公司的流式细胞仪大概率只有四个通道，所以不得不将一个实验拆成两个Panel：Th  ...

太感谢您了，您讲的非常明白，感谢您给予的帮助，可以提供FSC文件的，正在上传中，稍后给您发送云盘链接，辛苦您帮我看一下，谢谢谢谢。（公司只做了单染管，没有做FMO）

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司徒随风 发表于 2025-11-24 16:52
按您目前提供的信息看，大鼠脾脏样本Th17细胞应该是挂了，如果可以能不能分享一下FCS文件。 ...

老师，我还有个疑问请教您。
①为什么这里您说大鼠脾脏Th17细胞挂了会影响死活染色结果图呢？我这个小白理解的是死活染料应该是用来区分所有的活细胞与死细胞呀（包括Th细胞，Treg细胞，巨噬细胞，等等其和所有的死细胞）。
也就是说，这里即使Th17细胞死掉了，应该是还有其他活细胞能够染色并分群呀？
如果我理解的完全有问题，也请您多多批评指正，实在是没有人教我，人又比较笨。
②如果以上我的理解正确的话，脾脏细胞分出的Th17管和Treg管，其染死活染料呈现出来的结果应该不会差距太多，为什么脾脏Treg管的死活分型这么明显呢？
FSC文件链接附上，请您查阅。
通过网盘分享的文件：脾脏Th17和Treg结果.zip
链接: https://pan.baidu.com/s/1aGerGI00n_8EA__ZsbF2rQ?pwd=iqdb 提取码: iqdb

司徒随风

叮咚叮咚买菜 发表于 2025-11-25 22:32
老师，我还有个疑问请教您。
①为什么这里您说大鼠脾脏Th17细胞挂了会影响死活染色结果图呢？我这个小白 ...

1、小白理解的是死活染料应该是用来区分所有的活细胞与死细胞呀，这个理解没有问题，我说的大鼠脾脏样本Th17细胞应该是挂了，指的是Th17组里面的细胞挂掉了，表述不够清楚，向您道歉，按我的了解您这两个靶标分别是胞内和核内，而且Th17应该还会涉及激活的过程，建议问问公司。
2、正是因为脾脏Treg管的死活分型这么明显，我才认为Th17管，可能有问题，大概率是细胞活率不行。
3、图片是我根据阴性对照圈的门，Th17好像都没怎么染上，Treg的都有信号，但是好像没有全染管，就感觉挺奇怪的。

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司徒随风 发表于 2025-11-27 11:22
1、小白理解的是死活染料应该是用来区分所有的活细胞与死细胞呀，这个理解没有问题，我说的大鼠脾脏样本T ...

好的，真的非常感谢老师耐心细致地回复，还帮我重新跑了一下结果，非常感谢。
现在已经跟公司沟通了，但大概率不是调整圈门或者补偿能够改善的了，还是再次感谢老师。
另外，全染管是指FMO对照吗？即仅扣除一种荧光抗体，其他所有抗体都正常染色的对照。这个FMO对照公司确实没有做。
老师，我在想，可不可以补做呢？就是我再买几只同样年龄的大鼠，然后用它们的细胞做几管FMO对照，最后用来调整圈门或者补偿，这样是否可行呢？

司徒随风

叮咚叮咚买菜 发表于 2025-12-4 15:27
好的，真的非常感谢老师耐心细致地回复，还帮我重新跑了一下结果，非常感谢。
现在已经跟公司沟通了，但 ...

全染管是指FMO对照吗：不是，全染管是指把所有指标的染料都加入的样本管。即试验管。
可不可以补做：个人认为，他这个问题比较大，补做的话意义不是很大，如果可以的话建议重新做。

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司徒随风 发表于 2025-12-4 17:47
全染管是指FMO对照吗：不是，全染管是指把所有指标的染料都加入的样本管。即试验管。
可不可以补做：个人 ...

好的，非常感谢老师，试验管是放到压缩包里了的；感谢老师建议，我再去和导师沟通一下看要不要重做