流式分选和磁珠分选比较

gcz5340

CRP 发表于 2012-3-1 00:12

                               
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我不了解流式分选，但是美天旖的磁珠我倒是用了2年了，分选的Naive T纯度95%以上，80-90%有点少，是不符合 ...

         CRP说的很有道理啊。

      其实这个纯度我只是一个保守的说法，淋巴细胞分选是最成熟的，我检测过CD4和CD8的磁珠分选确实能超过90％，对于这种常见的单参数分选，流式分选能达到99%以上。
      污染的情况流式分选确实存在这个风险，如果操作得当，收集管里加好抗生素和抗真菌素，一般不会污染的。
      现在流式分选速度也已经很快了，普通分选仪进样速度最起码也有10000个/s，如果有50%的阳性率，每秒能分选5000个，一小时也能分选到1.8X10e7，相当可观了。

ddn111

感觉这两种方法共同的通病是标上的抗体要等自行降解，这个过程有点没谱！另外的话，我倒是觉得磁珠分的话可控性好点！做得熟练的话纯度也高。流式的话，一靠操作者技术水平，二靠仪器争气！

haven_t

10年前做过流式CD34分选，记得要调半天drop delay。中间那个模式，纯度大概80％，当然比例太低时杂质对纯度影响很大。成本相对高，抗体含叠氮钠，但似乎对培养影响不大。貌似仅能用矩形门进行分选，不知道现在仪器进步了没有，是否能支持多边形和逻辑门。

niwanmao

haven_t 发表于 2012-3-1 23:25

                               
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10年前做过流式CD34分选，记得要调半天drop delay。中间那个模式，纯度大概80％，当然比例太低时杂质对纯度 ...

你以前分选出来培养过？

haven_t

当时帮别人分选脐血CD34，分选后别人养的。关键是低于1%的阳性率，回收率超低，分选出来的细胞太少了，培养效果很难判断。当时还用个据说是战场上手术用的百级无菌罩把仪器罩住，但操作不顺手，用了一次就扔到一边去了。

liyouzzz_000

这个仪器可真是够聪明的呢~~~那是不是如果我用beads也能同样的进行分选呢？比如我采用同一种类的beads微球（类似细胞），然后在上面标记不同的荧光染料就能进行分选么？还是说那个电荷是充到细胞上从而实现分选的？

gcz5340

haven_t 发表于 2012-3-1 23:25

                               
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10年前做过流式CD34分选，记得要调半天drop delay。中间那个模式，纯度大概80％，当然比例太低时杂质对纯度 ...

10年前就做流式分选，前辈了。你说的accudrop那应该是BD的机器了，现在的分选仪液流系统都很稳定，延迟蛮好调的。多边形和逻辑设门这个Diva软件肯定都是可以的。

gcz5340

liyouzzz_000 发表于 2012-3-2 14:07

                               
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这个仪器可真是够聪明的呢~~~那是不是如果我用beads也能同样的进行分选呢？比如我采用同一种类的beads微球 ...

当然可以，只要你的beads大小合适，能流式检测就能分选。充电是对液滴充电的，小球和细胞包裹在这些液滴中间，液滴主要成分是鞘液。其实流式细胞仪调试时会用到很多带荧光的小球。

haven_t

gcz5340 发表于 2012-3-2 16:51

                               
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10年前就做流式分选，前辈了。你说的accudrop那应该是BD的机器了，现在的分选仪液流系统都很稳定，延迟蛮 ...

是vantage，每次开机都要调光路。分选时流率不敢太高，喷嘴好象是用75的，很怕它怕堵，堵了要放超声清洗器洗，洗完还要调光路，再调delay。

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-3-2 16:51

                               
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10年前就做流式分选，前辈了。你说的accudrop那应该是BD的机器了，现在的分选仪液流系统都很稳定，延迟蛮 ...

haven_t绝对是老资格的流式前辈，对流式原理理解很透彻。