CD69质控问题

niwanmao

CRP 发表于 2012-5-3 09:18

                               
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可能是有细胞碎片，但是在SSC-FL1图里，我的死细胞碎片和CD3阳性细胞是一团的，根本没有办法区分，活化率 ...

有阳性峰，我觉得刺激方案应该问题不大，我觉得就是这个碎片的干扰可能性最大。

你改变一下设门试试，按照下面两个画的方式：

第一个图的设门

CRP

niwanmao 发表于 2012-5-3 09:26

                               
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有阳性峰，我觉得刺激方案应该问题不大，我觉得就是这个碎片的干扰可能性最大。

你改变一下设门试试，按 ...

好的，我试试，谢谢您了

nsync4

我们的CD69不是常规检测，只有胞内因子检测有问题是会看看T淋巴细胞CD69的表达情况。你的方案应该没问题，至于其他问题个人认为：
1.刺激过程中，阻断剂的选择，刺激的时长（BFA和莫能霉素，时间久了细胞就会破碎）
2透膜剂的选择，特别是破膜第二步时间长了就会使细胞的SS和FS都降低。
3.仪器的原因，你可以看一下其他项目检测是否有问题来排除。

CRP

nsync4 发表于 2012-5-3 21:25

                               
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我们的CD69不是常规检测，只有胞内因子检测有问题是会看看T淋巴细胞CD69的表达情况。你的方案应该没问题， ...

我也是做胞内细胞因子检测才用到的，请问您平时做的时候活化率真有90%以上吗？表面和胞内的
我用的是阻断剂MN，莫能菌素，说明书上说是不超过12h，我刺激大概5.5h，破膜剂我是BD的，完全按照说明说破膜20min

最近小鼠好难买到等好了，我再试，谢谢您了

niwanmao

CRP 发表于 2012-5-4 08:59

                               
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我也是做胞内细胞因子检测才用到的，请问您平时做的时候活化率真有90%以上吗？表面和胞内的
我用的是阻断 ...

你用的是BD的Perm1还是Perm2？
我曾经用过Perm2，效果不好。胞内染色效果较好的是以前的CALTAG的fix&perm kit，现在该公司已被invitrogen收购，新的产品不知道效果怎么样。我们现在用foxp3的破膜剂（针对核内标记）来代替做胞内标记，效果确实还不错：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=1200

CRP

niwanmao 发表于 2012-5-4 09:08

                               
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你用的是BD的Perm1还是Perm2？
我曾经用过Perm2，效果不好。胞内染色效果较好的是以前的CALTAG的fix&perm ...

我用的货号是，BD的，NO.554714

niwanmao

CRP 发表于 2012-5-4 09:35

                               
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我用的货号是，BD的，NO.554714

哦，是Cytofix/cytoPerm，这个没用过，不清楚效果如何。

baolei0606

CRP 发表于 2012-5-4 09:35
我用的货号是，BD的，NO.554714

我也用的是这个，你用的效果如何？

liliqianyi

这个CD69    谁有相关的文献吗？   他是在细胞表面和细胞内表达的情况如何    最近也要做 个胞内染色    不太理解 胞内CD69 的表达

niwanmao

liliqianyi 发表于 2015-3-29 21:33
这个CD69    谁有相关的文献吗？   他是在细胞表面和细胞内表达的情况如何    最近也要做 个胞内染色    不 ...

胞内CD69通过固定、破膜染色实现，比较好的破膜剂有：Invitrogen的Fix&Perm、Beckman的Perfix nc等。