流式细胞仪结果解读

日月星辰

日月星辰 发表于 2012-8-2 09:45

                               
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我用的是diva软件，那就是不能叠加图了，下载了个flowjo~嘿嘿

倪老师，上面两个是我叠加之前的图，下面是叠加之后，怎么叠加后就没有显示上面图里的百分比了呢？

niwanmao

日月星辰 发表于 2012-8-2 16:43

                               
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倪老师，上面两个是我叠加之前的图，下面是叠加之后，怎么叠加后就没有显示上面图里的百分比了呢？
...

如果你要叠加，而且显示MARKER，那么就需要拖这群细胞的上级细胞到布局编辑器，
比如我要显示CD19＋细胞比例，那么设好直方图的MARKER之后，就把上级细胞群（图中红圈所示）拖到布局编辑器，就出现MARKER了，叠加后希望显示其比例的那个文件最后拖。

叠加示意

日月星辰

niwanmao 发表于 2012-8-2 16:58

                               
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如果你要叠加，而且显示MARKER，那么就需要拖这群细胞的上级细胞到布局编辑器，
比如我要显示CD19＋细胞比 ...

好的，谢谢~我一会试试。
倪老师，请问如果测一种不常用的细胞，在流式的散点图中，怎么看目标细胞在那个位置呢？（就像血液中的淋巴细胞，一般都在特定的位置那样）文献上只看到说圈定了目标细胞的gate，不过没有图，我不知道该圈在哪里咯？

niwanmao

日月星辰 发表于 2012-08-02 19:28:35

                               
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[quote]niwanmao 发表于 2012-8-2 16:58 [url=forum.php?mod=redirect&got

你可以反设门，比如你的细胞是A抗原阳性B抗原阳性，那么就在A，B散点图上圈子双阳性细胞，反过来看它们在FSC/SSC上的位置

日月星辰

niwanmao 发表于 2012-8-2 21:20

                               
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你可以反设门，比如你的细胞是A抗原阳性B抗原阳性，那么就在A，B散点图上圈子双阳性细胞，反过来看它们在F ...

只测了一种抗原呢？上图就是抗体/SSC的图，怎么看呢？

niwanmao

日月星辰 发表于 2012-8-2 22:00

                               
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只测了一种抗原呢？上图就是抗体/SSC的图，怎么看呢？

只做了一种抗原的话，就先设一个FSC/SSC点图，然后再设一个PE/SSC的点图，选择PE阳性的细胞（不知道你是要测这种标记阳性的细胞还是阴性的细胞？）设为R1，然后看R1门内的细胞在FSC/SSC点图上分布在哪个位置。

日月星辰

niwanmao 发表于 2012-8-3 09:06

                               
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只做了一种抗原的话，就先设一个FSC/SSC点图，然后再设一个PE/SSC的点图，选择PE阳性的细胞（不知道你是 ...

我测的是PE标记阳性的细胞，
1.我把PE标记阳性的细胞（除去微球）圈为R1后，在FSC/SSC图上没有特定的区域，而且基本覆盖了全部的细胞，哪里出了问题呢，不可能这些都是阳性细胞啊.....
2.这几个图都是同一个标本，左边3个图是同型对照，右边3个是加的抗体，抗体是PE标记的，但发现Pecp-cy5-5和APC也显示如此多的阳性（见第二和第三排），这是两种非特异性荧光吧，那PE/SSC图中也不排除有这么多非特异荧光.....怎么办....而且，加了抗体后于同型对照比没有太大的区别呢....

niwanmao

日月星辰 发表于 2012-08-03 14:49:59

                               
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[quote]niwanmao 发表于

Pe阳性不明显。
你测的标记正常情况下文献中表达水平如何？

日月星辰

niwanmao 发表于 2012-8-3 15:46

                               
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Pe阳性不明显。
你测的标记正常情况下文献中表达水平如何？

文献中说约10-50个/ul，有人做出来过，也只用的PE标记的，不知道他是怎么设门的....怎么办呢

niwanmao

日月星辰 发表于 2012-08-03 20:31:59

                               
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[quote]niwanmao 发表于 2012-8-3 15:46 [url=forum.php?mod=redirect&got

绝对定量？这么说你上面图中的最右侧那条拖尾是BEADS？