流式细胞仪结果解读

日月星辰 · 发表于 2012-8-4 09:52:53

本帖最后由日月星辰于 2012-8-4 09:54 编辑

niwanmao 发表于 2012-8-4 07:11

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绝对定量？这么说你上面图中的最右侧那条拖尾是BEADS？

是绝对定量，最右侧的是BEADS，是不是哪里有不对？

日月星辰 · 发表于 2012-8-4 10:01:10

niwanmao 发表于 2012-8-4 07:11

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绝对定量？这么说你上面图中的最右侧那条拖尾是BEADS？

会不会beads的荧光干扰呢？beads上有PE,PE-CY5.FITC,这三种荧光

niwanmao · 发表于 2012-8-4 10:13:50

日月星辰发表于 2012-08-04 10:01:10

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[quote]niwanmao 发表于 2012-8-4 07:11 [url=forum.php?mod=redirect&got

BEADS的分布应该是正常的，数据文件如果可以上传，建议上传给我们看看，分析起来比较方便。

日月星辰 · 发表于 2012-8-4 10:51:16

本帖最后由日月星辰于 2012-8-4 11:02 编辑

niwanmao 发表于 2012-8-4 10:13

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BEADS的分布应该是正常的，数据文件如果可以上传，建议上传给我们看看，分析起来比较方便。 ...

好的，非常感谢~这是两个样本的，分别有同型对照和加抗体的

流式.zip (2.31 MB, 下载次数: 14)

流式2.zip (2.39 MB, 下载次数: 17)

日月星辰 · 发表于 2012-8-5 14:38:52

niwanmao 发表于 2012-8-4 10:13

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BEADS的分布应该是正常的，数据文件如果可以上传，建议上传给我们看看，分析起来比较方便。 ...

倪老师，我上传的这个流式数据的格式可以吗？

niwanmao · 发表于 2012-8-5 22:25:36

日月星辰发表于 2012-8-5 14:38

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倪老师，我上传的这个流式数据的格式可以吗？

可以用，不知道你这些细胞的大小与beads比如何？大致看了下，觉得FSC、SSC点图左下这堆应该属于碎片。
今天刚开会回来，明天仔细分析分析看，抱歉。

niwanmao · 发表于 2012-8-6 14:52:19

日月星辰发表于 2012-8-4 10:51

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好的，非常感谢~这是两个样本的，分别有同型对照和加抗体的

碎片？

首先从FSC/SSC图上看，这类细胞的FSC大大小于beads，所以我觉得首先需要考虑是碎片，建议你下次可以上机前在显微镜下观察一下形态，然后再跟流式结果对应一下，就更明确了。
其次，似乎control和sample均存在一定的阳性细胞，我觉得可能存在一些非特异性染色，分析结果见下图和末尾的表格（表格内列出了细胞数量和beads数量，你可以根据已知的beads总数，根据公式计算出阳性细胞总数和密度）

分析结果

Depth	Name	Statistic	#Cells
	2012-07-12_16-C.fcs		50000
>	FSC-A, SSC-A subset	16.8	8400
> >	beads	52.8	4439
> >	positive	3	252
	2012-07-12_16-S.fcs		50000
>	FSC-A, SSC-A subset	16.2	8075
> >	beads	61.1	4936
> >	positive	2.75	222
	2012-07-12_29-C.fcs		50000
>	FSC-A, SSC-A subset	20.6	10296
> >	beads	68.6	7063
> >	positive	3.87	398
	2012-07-12_29-S.fcs		50000
>	FSC-A, SSC-A subset	21.8	10909
> >	beads	69.1	7539
> >	positive	4.46	487

日月星辰 · 发表于 2012-8-7 08:43:20

本帖最后由日月星辰于 2012-8-7 08:49 编辑

niwanmao 发表于 2012-8-6 14:52

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首先从FSC/SSC图上看，这类细胞的FSC大大小于beads，所以我觉得首先需要考虑是碎片，建议你下次可以上 ...

谢谢你，倪老师~
我没查到我所测细胞的大小，beads的大小是照文献上买的....惭愧...
下次在测之前我试试用显微镜观察一下，谢谢您给的宝贵建议

文献上说我所测的细胞不仅有完整的细胞，也有它的碎片......这会影响分析数据吗
请问非特异性染色，有没有什么好的办法能够减少呢？

niwanmao · 发表于 2012-8-7 09:12:25

日月星辰发表于 2012-8-7 08:43

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谢谢你，倪老师~
我没查到我所测细胞的大小，beads的大小是照文献上买的....惭愧...
下次在测之前我试试 ...

碎片不影响分析，只是碎片越少，说明你处理的越好，结果越可靠。

至于非特异性染色，我也没有特别好的建议，因为可能跟抗体克隆号有关，也可能跟洗涤有关，我建议你要么在加beads和染色之前用加BSA或FBS的洗涤液洗涤两次：
1、PBS＋1% BSA＋0.1%叠氮钠
2、PBS+1%FBS＋0.1%叠氮钠

注意：如果加了beads千万别洗涤，否则会影响绝对计数的准确性的。

日月星辰 · 发表于 2012-8-7 09:57:58

niwanmao 发表于 2012-8-7 09:12

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碎片不影响分析，只是碎片越少，说明你处理的越好，结果越可靠。

至于非特异性染色，我也没有特别好的建 ...

好的，我试试~

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