荧光扣除对照（FMO）概念和示例

samly0

哦，明白了，谢谢倪老师，我想我的思维模式固化了，在做多色补偿时，都是画散点图用单标管依次调，比如先调FL1通道跟其他通道的补偿，先依次减完FL2/3/4，再调FL2通道，依次减完FL3/4，最后调FL3，减FL4，以为这样子组合就可以全部消除荧光叠加，所以没有从来没有考虑到您说的调FL1与FL2时，FL3漏过来的信号这种情况，真没学到家，惭愧了

niwanmao

samly0 发表于 2013-4-2 11:00

                               
登录/注册后可看大图

哦，明白了，谢谢倪老师，我想我的思维模式固化了，在做多色补偿时，都是画散点图用单标管依次调， ...

呵呵，那倒不是，主要是现在的荧光越来越多，有时候荧光之间干扰也多起来了，所以FMO对照显得更为重要。

共同学习，共同进步！

niwanmao

samly0 发表于 2013-4-2 11:00

                               
登录/注册后可看大图

哦，明白了，谢谢倪老师，我想我的思维模式固化了，在做多色补偿时，都是画散点图用单标管依次调， ...

呵呵，那倒不是，主要是现在的荧光越来越多，有时候荧光之间干扰也多起来了，所以FMO对照显得更为重要。

共同学习，共同进步！

木石织梦

FMO怎么做呢？是不是在染色的时候就备一管除去目的荧光的其它荧光抗体染色，比如（FITC，PE，PE-Cy-7）三染的话，我要划PE荧光的门，要做一管（FITC，PE-Cy-7）上机作为对照，还是说，做3个单染调补偿后，在用Flowjo软件作图的时候，做一张FITC，PE-Cy7的图作为FMO对照？

niwanmao

木石织梦 发表于 2013-5-8 09:12

                               
登录/注册后可看大图

FMO怎么做呢？是不是在染色的时候就备一管除去目的荧光的其它荧光抗体染色，比如（FITC，PE，PE-Cy-7）三染 ...

要做一管（FITC，PE-Cy-7）上机作为FMO对照

椴树

niwanmao 发表于 2013-4-2 10:17

                               
登录/注册后可看大图

我前面说过，如果你是两色，那么你所说的单标管就等于FMO，所以你说的用单标管划门没有错。

但如果是3色 ...

老师 那这样说的话，我FITC和PE有渗漏，但是APC跟它们不一个激发器啊，其实还是相当于2色的？那就不用做额外的FMO了不？

niwanmao

椴树 发表于 2013-5-13 10:44

                               
登录/注册后可看大图

老师 那这样说的话，我FITC和PE有渗漏，但是APC跟它们不一个激发器啊，其实还是相当于2色的？那就不用做 ...

从理论上说是可以不需要做，但如果严谨起见，多做一个FMO未尝不是一个更好的方法。

椴树

niwanmao 发表于 2013-5-13 11:21

                               
登录/注册后可看大图

从理论上说是可以不需要做，但如果严谨起见，多做一个FMO未尝不是一个更好的方法。 ...

恩 好的

fage

嗯 水平好高，涨知识

lin850424

倪老师，按照您的意思，根据上面这个例子，是不是得分这些组
1   blank
2   FITC单标
3   PE单标
4   cy5PE单标
5   cy7PE单标
6   （-）+PE+cy5PE+cy7PE           (FITC的FMO对照)
7    FITC+（-）+cy5PE+cy7PE        (PE的FMO对照)
8    FITC+PE+（-）+cy7PE              (cy5PE的FMO对照)
9    FITC+PE+cy5PE+（-）             (cy7PE的FMO对照)
10  FITC++PE+cy5PE+cy7PE
是需要分这些组吗？还是能简化一下，否则那也太费抗体了吧？