磁珠分选有没有特别的注意事项？

小憨

niwanmao 发表于 2013-6-8 16:44
@samly0   按照你的经验，流式的分选纯度高还是磁珠的分选纯度高？

这个问题其实很好就得到答案了，纯度的检测不就是再跑一遍流式么，肯定流式高啊。两个应用不同原理运转的体系，评价手段是其中的一个，你说另一个能不吃亏么~
流式分选有它的优势，能分开同一个指标高表达和低表达的细胞；而磁珠只能区分阴或阳，是全或无的概念。
磁珠的优势一个是简便，但成本其实也没低哪里去（美天旎的1个LS柱子就要快一百！有时我一下午就要干掉8根柱子），但现在有了不需要过柱子的kits（比如stemcell，我不是打广告啊），经济成本和时间成本一下子就降低了，所以应用前景还是很好的~另外，磁珠分选的对细胞损害小；保证细胞活性，没有污染问题是我最看重的。

小憨

mengdecao 发表于 2015-5-29 01:56
磁珠阳选后细胞的纯度达到了98－100%，理论上是可行的。请问分选后，你是如何测其纯度的？洗脱后细胞你是 ...

抗体和磁珠一般会结合一段时间的，这个没办法避免，我试过用FITC标记抗体和抗FITC磁珠的阳选，细胞培养一周FITC还都是阳性的。
另外阳选时抗体和磁珠会对靶细胞造成一定的影响，比如你用CD3+作为T细胞的分选marker，那T细胞肯定是要被活化的，那你这样分选到的细胞肯定不是resting的T细胞。

Jing310

老师，您好，最近也在做磁珠分选，有几个问题想请教下：
我用间接法做，想要单核细胞
1 细胞加上柱子后，收集流出的液体里面也有阳性细胞，这是什么原因，是不是不是所有的阳性细胞都能被磁珠吸附?我用的是美天旎的，然后说明书上说上完柱子后用缓冲液洗3次，但是三次后收集的液体还是又细胞，是不是可以继续加大缓冲液的量继续洗？
2 用间接法获得的细胞，细胞上既有抗体又有磁珠，我需要做后续培养，这会不会影响细胞活性，能不能做细胞培养？

木石织梦

Jing310 发表于 2016-1-19 09:31
老师，您好，最近也在做磁珠分选，有几个问题想请教下：
我用间接法做，想要单核细胞
1 细胞加上柱子后，收 ...

我凭经验回答您，可能并不准确。
第一个问题，你可能需要考虑下细胞数量和柱子可承载的最大细胞量，如果细胞一次上太多，有可能柱子挂不住。最好细胞上柱子之前先润湿柱子，不要留气泡。我不明白的是，你到底是要阳性的细胞还是阴性的细胞？阳性的细胞，管他冲下去多少，留着柱子上是你要的就可以啊。如果是要阴性的细胞，那就再过一次柱子呗，呵呵~为何这么纠结？
第二个问题是不会影响细胞活性，我有培养过，似乎没事。也不会影响流式染色。

小憨

liliqianyi 发表于 2013-12-12 10:07
samlyo老师，近期我做的treg分选纯度还不错，但是发现阳选后，从柱子打下来的treg细胞，台盼蓝染色，挺多 ...

Treg就是不爱增殖啊，有文献报道说能体外扩增Treg的？

niwanmao

小憨 发表于 2016-1-24 11:12
Treg就是不爱增殖啊，有文献报道说能体外扩增Treg的？

美天旎有Treg的扩增Kit：http://www.miltenyibiotec.com.cn ... sion-kit-human.aspx

不过应该比较贵。

niwanmao

小憨 发表于 2016-1-24 11:12
Treg就是不爱增殖啊，有文献报道说能体外扩增Treg的？

美天旎有Treg的扩增Kit：http://www.miltenyibiotec.com.cn ... sion-kit-human.aspx

不过应该比较贵。

liliqianyi

niwanmao 发表于 2016-1-24 12:02
美天旎有Treg的扩增Kit：http://www.miltenyibiotec.com.cn/zh-cn/products-and-services/macs-cell-cult ...

效果不太好的，ntreg体外很难扩增，虽然文献报道甚至扩增几百倍，但实际实验，我自己一直是扩增不了的。

Jing310

木石织梦 发表于 2016-1-23 11:52
我凭经验回答您，可能并不准确。
第一个问题，你可能需要考虑下细胞数量和柱子可承载的最大细胞量，如果 ...

嗯，后来发现做多了后，就没那么纠结了，谢谢解答。

fitlao

@samly0  老师您好，看到您在6楼提到“分选完了，我们再加buffer用活塞打三遍”，这样是可以提高细胞的得率吗？因为之前我们都按 Miltenyi 磁珠说明 MS柱 buffer 1ml 快速打一次。
谢谢！