JC-1检测膜电位结果如何分析？

dragonhzqsmmu

第二篇是做的JC-1评估白血病细胞功能和P糖蛋白表达的，发现JC-1的结果与Anneix V/PI高度一致，一箭双雕？？？

dragonhzqsmmu

现在好像有一种新的染料出来了，水溶性更好，荧光信号更强，叫JC-10

dragonhzqsmmu

刚刚查到一篇比较新的文章，对JC-1的protocol提出改进，发现用405nmUV激发的效果要优于488nm的激发protocol，拥有UV405激光的新流式细胞仪有福气了

niwanmao

'I' 发表于 2013-6-4 21:04

                               
登录/注册后可看大图

好的   我还想问一下倪老师   那什么情况下是用红绿荧光强度比值来表示膜电位的改变呢？ 因为看到很多文 ...

奇怪，你的回复我都没有注意到。比值我们没用过，至少我们以前发文章都是直接算那堆细胞的比例。

'I'

niwanmao 发表于 2013-6-6 21:31

                               
登录/注册后可看大图

奇怪，你的回复我都没有注意到。比值我们没用过，至少我们以前发文章都是直接算那堆细胞的比例。 ...

恩。好的~   非常感谢倪老师的热心帮助，流式盲在这里收获很多~~！

'I'

dragonhzqsmmu 发表于 2013-6-6 15:52

                               
登录/注册后可看大图

http://www.cyto.purdue.edu/archive/flowcyt/research/cytotech/apopto/data/cossar1/cossariz.htm

我在 ...

谢谢你提供的资料呀~~  我看的文献，一般都是用碧云天公司的

niwanmao

'I' 发表于 2013-6-7 19:14

                               
登录/注册后可看大图

谢谢你提供的资料呀~~  我看的文献，一般都是用碧云天公司的

发文章，方法学尽可能参考国外影响因子高的文章。

boiledtea

我的理解是，JC-1实验简单来说看的是膜电位低的那群的百分比变化，即图中C+-那群。。。

didi_zhou

dragonhzqsmmu 发表于 2013-6-6 16:12

                               
登录/注册后可看大图

附上两篇参考文献供大家学习，第一篇提到用JC-1和TOTO3作为细胞凋亡的评估，这个能代替Anneix V/PI？ ...

应该说这些检测基本就是等效的吧。也不是说代替不代替。凋亡发生时本来细胞就会发生一些特定的细胞生理变化，比如胞内钙离子的动员、Caspase激活、线粒体膜电位丢失、细胞膜PS外翻、DNA断裂核碎片形成等等，这些都是可以用流式来检测的。只不过现在大家读到比较多、做得比较多的就是AV/PI法，检测PS外翻。

但是这个方法应该只是用悬浮细胞，贴壁细胞不是很合适，所以很多人其实也得不到很好的结果，具体问题可以用几个小时的时间来讲了。

因为贴壁细胞的种种原因，其实使用JC-1（线粒体膜电位丢失）与活性Caspase-3的检测是更好的方法，它不受细胞壁的影响，消化这个过程带来的影响可以在很大程度上消除。但是由于很多问题（比如“文献是这么做的”、“师兄师姐都是这么做的”、……），这些方法没有被广泛使用。大家还是要多推广推广啊！