理解流式数据中的MFI

niwanmao

刘星宇 发表于 2013-6-5 21:01

                               
登录/注册后可看大图

是否是同型对照的背景过高了？没有用无荧光抗体拮抗掉非特异性受体？或者洗涤不够？我之前的也是检测管减 ...

原因说的没错，只是不建议用减的方式来计算结果。

20071271

niwanmao 发表于 2013-6-5 11:55

                               
登录/注册后可看大图

你所说的对照是同型对照还是阴性对照？

阴性对照

niwanmao

20071271 发表于 2013-6-6 09:47

                               
登录/注册后可看大图

阴性对照

同型对照出现这类情况比较多，原因多数就是象@刘星宇  所说的那样。
阴性对照如果出现这类情况，如果确认染色步骤均一致，就需要注意细胞的状态。

刘星宇

haven_t 发表于 2013-6-5 21:22

                               
登录/注册后可看大图

减法是不行的，应该用除法。

原来是这样。曾在AMERICAN JOURNAL OF RESPIRATORY AND CRITICAL CARE MEDICINE 文献看到：“Inset: Numbers indicate the median fluorescence intensity (MFI) minus the MFI of the isotype control.”作者用的就是MFI的差值表示。

niwanmao

刘星宇 发表于 2013-6-6 21:04

                               
登录/注册后可看大图

原来是这样。曾在AMERICAN JOURNAL OF RESPIRATORY AND CRITICAL CARE MEDICINE 文献看到：“Inset: Numbe ...

减法的话，流式专业杂志肯定很难接受。像这本是呼吸病的好杂志，可能其研究结果吸引评审，但这种方法真的接受不了

刘星宇

niwanmao 发表于 2013-6-6 21:50

                               
登录/注册后可看大图

减法的话，流式专业杂志肯定很难接受。像这本是呼吸病的好杂志，可能其研究结果吸引评审，但这种方法真的 ...

又解开一些疑惑了。一直困惑之前的结果，那百分比可以相减的吧？百分比相减后多是正值，虽然数值不高。另外想问，如果检测管比上同型对照管为小于1的值，那很大原因还是背景高所致吧？

david.yanqi

受教了，有个问题，我做出来的流式其荧光表达强度很高啊，算geoMFI有104次方一般，而阴性对照一般都在102次方左右，这时候分析MFI应该怎么办呢？是相除吗？我看文献一般MFI都是几十或是几百的，新手求教，老师不要取笑我啊。。

niwanmao

david.yanqi 发表于 2013-6-8 22:21

                               
登录/注册后可看大图

受教了，有个问题，我做出来的流式其荧光表达强度很高啊，算geoMFI有104次方一般，而阴性对照一般都在102次 ...

不叫geomfi，是geomean，该是多少就多少。不过就如上面所讨论那样，能不用mfi尽可能别用

david.yanqi

niwanmao 发表于 2013-6-8 22:28

                               
登录/注册后可看大图

不叫geomfi，是geomean，该是多少就多少。不过就如上面所讨论那样，能不用mfi尽可能别用 ...

哎，，我测的那个分子全部100%表达，只有这个mean 存在差异，就在直方图会往左边偏一些，所以只能这样分析，姑且认为两者有差异，不然单从表达来看，就没有阳性结果了，，不知道这样可行不？老师，，谢啦。

niwanmao

david.yanqi 发表于 2013-6-8 22:33

                               
登录/注册后可看大图

哎，，我测的那个分子全部100%表达，只有这个mean 存在差异，就在直方图会往左边偏一些，所以只能这样分 ...

嗯，那只能用geomean或者median，看你的分布形态而定