请各位大侠们 CD3/CD28共刺激小鼠脾脏细胞（CFSE检测）

pushiming77

samly0 发表于 2013-6-27 16:24

                               
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我也用过U型板，我在铺板前用抗体包被板子，刺激细胞效果更好点，具体做法是：在分离细胞铺板前，先计算包 ...

我现在正在试验CFSE是不是浓度太高了。希望明天有很好的结果出来。

samly0

pushiming77 发表于 2013-6-27 20:08

                               
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就是先用抗体铺于板底吗？听起来有一点意思。必须试一下。
对了，师姐，你们实验部有LLC(C57BL/6的肺癌细 ...

没有哦，肺癌只有A549

pushiming77

samly0 发表于 2013-6-28 09:14

                               
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没有哦，肺癌只有A549

哦，我要C57BL/6小鼠的LLC。好烦呀！谢谢

pushiming77

这个实验我基本做成功了，主要问题是染色的均匀问题。用快速混匀器混匀1-2秒(j时间不能太长，太长会有细胞成团，而且吹也吹不开)后染色，每过2min，摇动离心管，防止细胞下沉造成染色不均一。终止时也一样，均匀很重要。
实验还表明，一个孔的细胞越多，增殖效果更明显。

谢谢各位老师和同僚，谢谢流式中文网给了这么好一个平台。

liaoyanchun

samly0 发表于 2013-6-27 16:24

                               
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我也用过U型板，我在铺板前用抗体包被板子，刺激细胞效果更好点，具体做法是：在分离细胞铺板前，先计算包 ...

你好,那anti-cd3包被的浓度 还有anti-cd28的浓度你们用多少?我也包被但是效果不好

samly0

liaoyanchun 发表于 2013-8-1 08:27

                               
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你好,那anti-cd3包被的浓度 还有anti-cd28的浓度你们用多少?我也包被但是效果不好 ...

跟最后加入的刺激浓度是一样的呀

samly0

哦，开始都是5ug/ml,效果很好，后面也减到2ug/ml试过，还可以

liaoyanchun

samly0 发表于 2013-8-1 10:16

                               
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哦，开始都是5ug/ml,效果很好，后面也减到2ug/ml试过，还可以

你们的脾细胞或者是CD4T细胞最多能养到几天，我养到3天的时候基本就有一半的T细胞死亡，因为th17诱导的需要急需养到6-7天的时候基本上都死了，也找不到原因，还有我是用24孔板养的，听说用96孔养的会比较好，是这样吗？96孔板的细胞量能用到多少？迷茫中

liaoyanchun

samly0 发表于 2013-6-27 16:24

                               
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我也用过U型板，我在铺板前用抗体包被板子，刺激细胞效果更好点，具体做法是：在分离细胞铺板前，先计算包 ...

亲爱的samly0,抗体包被96孔板是只用anti-cd3，还是其他需要加的抗体一起加进去混匀孵育？

samly0

只用anti-CD3包被，TGF-b1、IL-6、IL-1b、anti-IFNr、IL-23都是铺板时加的，培养72小时后再加PMA、Io、BrA等刺激，6~8h后上机检测，我当时做DC对Th分化过程中的影响，所以整个体系还加了DC细胞混合作用，都不算理想，不过这个课题我只参与了开头，后面毕业就没机会继续探讨了，所以Th17的培养体系给不了太多建议