请各位大侠们 CD3/CD28共刺激小鼠脾脏细胞（CFSE检测）

samly0

liaoyanchun 发表于 2013-8-1 10:26

                               
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你们的脾细胞或者是CD4T细胞最多能养到几天，我养到3天的时候基本就有一半的T细胞死亡，因为th17诱导的需 ...

纯的CD4T细胞在体外培养如果不加刺激只加培养基肯定会死得快，都要加刺激才会活化增殖的，加了刺激的，3天增殖最明显，5天还有增殖，没见有那么明显的死亡

liaoyanchun

samly0 发表于 2013-8-1 16:17

                               
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纯的CD4T细胞在体外培养如果不加刺激只加培养基肯定会死得快，都要加刺激才会活化增殖的，加了刺激的，3 ...

我加了抗体刺激,就是不知道抗体的浓度是否合适,anti-cd3 5ug/ml包板,anti-cd28  2ug/ml游离,不知道这个浓度是否对细胞有抑制作用

samly0

liaoyanchun 发表于 2013-8-1 22:55

                               
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我加了抗体刺激,就是不知道抗体的浓度是否合适,anti-cd3 5ug/ml包板,anti-cd28  2ug/ml游离,不知道这个浓 ...

这个浓度我没做过，实践出真知，你观察看看会不会抑制就知道了，呵呵

samly0

我们当时认为TGF-b1、IL-6、IL-1b、IL-23的浓度高低都能影响CD4+T细胞分化为Th17亚群的比例，所以这几个因子的浓度梯度我都做了，大概做了16个不同浓度的搭配方案，不过诱导出的Th17的比例都不太理想，由于这是我毕业前两个月做的，离开后就没机会继续了

qingfeng92

samly0 发表于 2013-6-26 09:25
小鼠脾脏淋巴细胞很小的，而且是悬浮细胞，铺96孔板是由于重力作用沉降到板底，不算贴壁生长的，你左右水 ...

你好，如果用24孔板刺激培养小鼠脾细胞的话，2×106/ml,1ml/孔和1×106，1ml/孔哪个条件更适合？

samly0

qingfeng92 发表于 2016-8-8 16:47
你好，如果用24孔板刺激培养小鼠脾细胞的话，2×106/ml,1ml/孔和1×106，1ml/孔哪个条件更适合？ ...

我一般用2x106

206895386

你好，我也做的是CFSE的，脾脏淋巴细胞的。就是细胞我染CFSE之后，分成若干份，一份不加ConA刺激，剩余的加ConA刺激，培养几天后收集检测。最后检测的时候不加刺激的那一份没检测到CFSE信号而其他加ConA刺激的检测到CFSE信号。这是什么原因？

zhuangrui911

niwanmao 发表于 2013-6-21 10:52
这条件确实很难摸，要在细胞死亡和增殖之间找到一个细胞密度、CFSE浓度两个指标的均衡点。@pushiming77  ...

您好，请问如果淋巴细胞不用96孔板激活，改用中皿激活，cd3浓度2ug/ml，cd28浓度2ug/ml是否可以？还是必须用96孔板来激活？
如果我最后需要总的淋巴细胞数量为6x10^6,用96孔板激活，激活后将数个孔内的淋巴细胞收集到一起？