Annexin V and PI做细胞凋亡遇到的问题

sally_no10

还有问题…好吧等你看到再说吧。

cccssszzz08

单阳试试双氧水刺激。另外你可以用FL3收集PI的荧光信号，这样貌似图比较好看。

gotofcm

sally_no10 发表于 2013-7-8 08:50

                               
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1.分群好就不需要做单染。个人觉得单染就是调补偿用。补偿可以的话是可以不做。
2.为啥要用乙醇处理？不需 ...

高手，顶一个!

cellprobe

niwanmao 发表于 2013-7-4 20:46

                               
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两者细胞看上去多少这是视觉上的误差，你可以看百分比就知道了。

倪老师好，大家好，感谢大家的热心回复。我前天又重复了一次实验。我用Doxorubicin处理6小时的OCILY19细胞作为没染色对照调节电压，Doxorubicin处理6小时的OCILY19细胞分别染FITC和PI作为调节补偿的对照。其结果如下：


今天我还是这样做的：我用Doxorubicin处理6小时的OCILY19细胞作为没染色对照调节电压，Doxorubicin处理6小时的OCILY19细胞分别染FITC和PI作为调节补偿的对照。但是我想用OCILY19细胞的FACS条件直接做另外一个细胞：Ramos。可是结果很奇怪：为什么在Ramos的FL1-FL2散点图里面看不到细胞？而且结果很怪异？是不是因为一个细胞的FACS电压和补偿条件是不能用到另外一个细胞上面？我是准备用药物处理三十多种不同的细胞。是不是每个细胞都要做自己单染的对照：cell A(treated+unstained), cell A(treated,FITC), cell A(treated,PI), cellA (untreated, FITC+PI）， cellA (treated, FITC+PI).

请大家指点，我因为至少一次要做几种不同的细胞，所以不知道怎么设置对照和调节设置啊？

niwanmao

cellprobe 发表于 2013-7-11 20:26

                               
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倪老师好，大家好，感谢大家的热心回复。我前天又重复了一次实验。我用Doxorubicin处理6小时的OCILY19细 ...

哪个是ramos的图？

我的建议是这样的，每种细胞，有时可能由于非特异性荧光，在补偿上可能会有轻微的差异，但可以不去管它，因为AV-PI的几群细胞都分得很好，因此，你要调节电压和补偿，只要一组细胞即可。
你上面这个FL2-FL1减的太多了，补偿的标准是使阳性细胞群的MEDIAN和阴性细胞群的MEDIAN在一个水平线上。

cellprobe

niwanmao 发表于 2013-7-11 20:54

                               
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哪个是ramos的图？

我的建议是这样的，每种细胞，有时可能由于非特异性荧光，在补偿上可能会有轻微的差 ...

对不起，刚才上面的那几幅图都是OCILY19的。下面是Ramos的图。

cellprobe

cellprobe 发表于 2013-7-11 21:07

                               
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对不起，刚才上面的那几幅图都是OCILY19的。下面是Ramos的图。

倪老师，我今天就是这样做的：调节电压和补偿，只要一组细胞即可。我是用OCILY19调节电压和补偿，可是Ramos细胞的数据太怪了啊。

niwanmao

cellprobe 发表于 2013-7-11 21:07

                               
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对不起，刚才上面的那几幅图都是OCILY19的。下面是Ramos的图。

在上流式细胞仪检测前，有没有在显微镜下面查看过细胞，可能你的RAMOS细胞都没了。

cellprobe

niwanmao 发表于 2013-7-11 21:12

                               
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在上流式细胞仪检测前，有没有在显微镜下面查看过细胞，可能你的RAMOS细胞都没了。 ...

这是Ramos细胞的散点图，显微镜下面看起来也可以。用 Flowjo分析，细胞也是记了1万个。可是FL1-FL2散点图？

niwanmao

cellprobe 发表于 2013-7-11 21:15

                               
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这是Ramos细胞的散点图，显微镜下面看起来也可以。用 Flowjo分析，细胞也是记了1万个。可是FL1-FL2散点图 ...

放个十字门在AV－PI上，看看各个象限比例。从FSC-SSC散点图看细胞似乎不太好。