Annexin V and PI做细胞凋亡遇到的问题

cellprobe · 发表于 2013-7-11 22:01:26

niwanmao 发表于 2013-7-11 21:53

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放个十字门在AV－PI上，看看各个象限比例。从FSC-SSC散点图看细胞似乎不太好。 ...

貌似活细胞的比例很多，可是为什么在散点图上看不见啊？

niwanmao · 发表于 2013-7-11 22:34:24

cellprobe 发表于 2013-7-11 22:01

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貌似活细胞的比例很多，可是为什么在散点图上看不见啊？

这种坐标轴外的信号，一般都是有问题的，应该不会是活细胞。

cellprobe · 发表于 2013-7-11 22:39:16

niwanmao 发表于 2013-7-11 22:34

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这种坐标轴外的信号，一般都是有问题的，应该不会是活细胞。

从哪里看出来是坐标轴外面的信号？谢谢

niwanmao · 发表于 2013-7-11 22:40:44

cellprobe 发表于 2013-7-11 22:39

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从哪里看出来是坐标轴外面的信号？谢谢

Q4比例非常高，但是细胞几乎看不到，就提示信号都在坐标轴外。

cellprobe · 发表于 2013-7-11 22:47:59

niwanmao 发表于 2013-7-11 22:40

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Q4比例非常高，但是细胞几乎看不到，就提示信号都在坐标轴外。

请问怎样调整？是FL1太大还是FL2太大？

niwanmao · 发表于 2013-7-11 22:50:28

cellprobe 发表于 2013-7-11 22:47

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请问怎样调整？是FL1太大还是FL2太大？

你尝试一下把FL1和FL2的电压都分别调高试试，看看信号会不会出来。我总觉得这些信号已经不正常了。

cellprobe · 发表于 2013-7-11 22:59:17

是在使用FACScalibur收集数据的时候调整FL1和FL2的电压吗？用flowjo行吗？

cellprobe · 发表于 2013-7-12 00:04:17

倪老师，是不是可以这样认为：“每个细胞的电压和荧光补偿条件还是不同。所以每个细胞组还是要用已经凋亡的细胞做单染来调节电压和补偿？OCILY19要用凋亡的OCILY19来调节？Ramos要用凋亡的Ramos来调节？

niwanmao · 发表于 2013-7-12 08:55:30

cellprobe 发表于 2013-7-11 22:59

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是在使用FACScalibur收集数据的时候调整FL1和FL2的电压吗？用flowjo行吗？

获取的时候调节FL1和FL2的电压，看看坐标轴外的细胞是否会出现。

niwanmao · 发表于 2013-7-12 08:58:26

cellprobe 发表于 2013-7-12 00:04

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倪老师，是不是可以这样认为：“每个细胞的电压和荧光补偿条件还是不同。所以每个细胞组还是要用已经凋亡的 ...

一般来说，可以所有种类的细胞都用同一个电压和补偿，除非少量背景荧光较强的可能需要微调一下，不需要单独设置。你这里的RAMOS这个问题总感觉不正常，你先在获取的时候调节一下FL1、FL2电压试试，看看能不能调出来

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