Annexin V and PI做细胞凋亡遇到的问题

cellprobe · 发表于 2013-7-12 09:01:16

niwanmao 发表于 2013-7-12 08:55

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获取的时候调节FL1和FL2的电压，看看坐标轴外的细胞是否会出现。

获取的时候调节FL1和FL2的电压,所以compensation也应该会变。所以我还是每个细胞都尝试用它的单染调节电压和补偿了。

niwanmao · 发表于 2013-7-12 09:10:26

cellprobe 发表于 2013-7-12 09:01

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获取的时候调节FL1和FL2的电压,所以compensation也应该会变。所以我还是每个细胞都尝试用它的单染调节电 ...

我的意思你可能还没理解。你获取时调节一下电压，看看那群在坐标轴外的细胞能不能出来，如果能出来，最好，如果出不来，就说明有问题。补偿的调节对于这些分群明显的细胞，非常简单，不需要单染来调，直接看着双染的细胞分群调节即可。

cellprobe · 发表于 2013-7-12 09:16:46

niwanmao 发表于 2013-7-12 09:10

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我的意思你可能还没理解。你获取时调节一下电压，看看那群在坐标轴外的细胞能不能出来，如果能出来，最好 ...

倪老师，恕我愚钝，在坐标轴外面的细胞指的是哪一群细胞？请在RamosFL1-FL2图上告诉我。谢谢了

niwanmao · 发表于 2013-7-12 10:29:24

cellprobe 发表于 2013-7-12 09:16

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倪老师，恕我愚钝，在坐标轴外面的细胞指的是哪一群细胞？请在RamosFL1-FL2图上告诉我。谢谢了 ...

从比例推测，细胞肯定位于坐标轴外。

cellprobe · 发表于 2013-7-13 19:28:08

niwanmao 发表于 2013-7-12 10:29

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从比例推测，细胞肯定位于坐标轴外。

倪老师，您好。我前几次用OCILY19细胞单染的FITC和PI调节电压和补偿，此种调节对于OCILY19来说基本是合适的。我第一次用OCILY19的FACS设置收集Ramos细胞时，数据很怪异，结果在楼上。但是当我第二次，还是用OCILY19的FACS设置收集Ramos细胞时候，好像结果还可以。请您帮我看看，数据有问题吗？

我不知道这2次差异为什么这么大。实验操作不同的地方：第一次是用抗体处理细胞，第二次是用化合物处理细胞；第一次和第二次FACS染色条件一样，只是第一次没有细胞计数，第二次细胞计数了；第一次和第二次都是完全用OCILY19细胞的FACS设置，只是第二次把SSC的电压稍微降低了一些，其他的设置都没变。

niwanmao · 发表于 2013-7-14 18:45:42

cellprobe 发表于 2013-07-13 19:28:08

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倪老师，您好。我前几次用OCILY19细胞单染的FITC和PI调节电压和补偿，此种调节对于OCILY19来说基本是合适

你看，这次就是有细胞的，这才是对的结果。上次的结果就是不正常的，至于原因，首先怀疑ramos细胞成碎片了。如果细胞确认都活的，问题就有可能出在流式细胞仪管路脏或不通畅上。总之，上次的ramos结果不能用。

cellprobe · 发表于 2013-7-14 19:41:13

niwanmao 发表于 2013-7-14 18:45

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你看，这次就是有细胞的，这才是对的结果。上次的结果就是不正常的，至于原因，首先怀疑ramos细胞成碎片了 ...

我觉得倪老师的意见非常好。我会再用第二次电压和补偿的条件重复一下。首先我要排除细胞没死，还有流式细胞仪是干净和通畅的。您再看看上图中Ramos/FITC+PI在补偿方面基本还行吧？

niwanmao · 发表于 2013-7-15 09:13:50

cellprobe 发表于 2013-07-14 19:41:13

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我觉得倪老师的意见非常好。我会再用第二次电压和补偿的条件重复一下。首先我要排除细胞没死，还有流式细

基本可以，fl1-fl2可以适当减小一点

cellprobe · 发表于 2013-7-15 18:47:23

niwanmao 发表于 2013-7-15 09:13

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基本可以，fl1-fl2可以适当减小一点

Fl1-FL2已经是0了，倪老师。

niwanmao · 发表于 2013-7-15 21:06:23

cellprobe 发表于 2013-07-15 18:47:23

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Fl1-FL2已经是0了，倪老师。

哦，那么就可能是细胞本身的问题，没关系，条件可以

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