Annexin V and PI做细胞凋亡遇到的问题

cellprobe

niwanmao 发表于 2013-7-15 21:06

                               
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哦，那么就可能是细胞本身的问题，没关系，条件可以

倪老师，我今天再次用抗体处理细胞，得到的数据如下。


只要我是用药物处理细胞，数据就不错，只要用抗体处理细胞，数据就很差,Q3和Q4的细胞看不见。我觉得原因是FITC和PI染色不够，细胞数目太多造成了FITC和PI染色太淡，只能看见FITC和PI都是阳性的Q2。我在用药物处理细胞时，时间只有几个小时，所以我知道细胞的数目。我用抗体处理细胞的protocol是别人的，细胞处理几十个小时，而且没有细胞计数。可能真的是因为细胞数目太多，造成染色失败。您觉得可能吗？

niwanmao

cellprobe 发表于 2013-7-16 19:36

                               
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倪老师，我今天再次用抗体处理细胞，得到的数据如下。

奇怪，怎么还是Q4的细胞出不来呢？按道理染色太淡也不应该出不来的，最多只能算阴性细胞群，而且Q2有细胞的，说明染上去了。
感觉还是细胞状态的问题吧，镜下看一下细胞吧。

@didi_zhou 和@samly0  有什么看法？

didi_zhou

niwanmao 发表于 2013-7-17 11:19

                               
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奇怪，怎么还是Q4的细胞出不来呢？按道理染色太淡也不应该出不来的，最多只能算阴性细胞群，而且Q2有细胞 ...

要看看原始数据才行。如果只是贴边的话我觉得染色和分群成功的，只是电压偏小了。

samly0

FS和SS散点图怎么样啊？不加抗体的对照细胞有Q4么？

cellprobe

samly0 发表于 2013-7-18 11:04

                               
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FS和SS散点图怎么样啊？不加抗体的对照细胞有Q4么？

这是我今天用FACSCabilur搜集数据，再用 Flowjo补偿。我觉得不对劲啊

niwanmao

cellprobe 发表于 2013-7-18 19:01

                               
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这是我今天用FACSCabilur搜集数据，再用 Flowjo补偿。我觉得不对劲啊

我觉得十字门你应该这么画：

设门

cellprobe

niwanmao 发表于 2013-7-18 21:00

                               
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我觉得十字门你应该这么画：

谢谢，我还是没有补偿好。我每天用FACSArray做一次。

samly0

Flowjo也可以调补偿了？啥版本的呀？

niwanmao

samly0 发表于 2013-7-19 09:14

                               
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Flowjo也可以调补偿了？啥版本的呀？

@haven_t 的CFCS也可以调补偿。

samly0

niwanmao 发表于 2013-7-19 09:54

                               
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@haven_t 的CFCS也可以调补偿。

@haven_t 老师开发的流式分析软件我知道可以离线调补偿，但我不知道flowjo也可以离线调补偿的呢，是不是因为我手里的版本太旧了？