七种颜色有FITC Tears Red PE APC V450 PE-Cy5.5 PE-Cy7.7 ,如何调补偿

culturelily

个人认为，compbeads唯一的不好就是不能用在PI这类染料来调整补偿，最后的最后还是得用细胞来调。

爱白衣杀手

haven_t 发表于 2013-7-19 11:50
comp beads是没有颜色的，捕获抗体后才有颜色。

请问微球的补偿效果好吗？说是补偿与电压和荧光相关，我怎么觉得换了细胞补偿也变了啊，那微球岂不是更不准确？

niwanmao

爱白衣杀手 发表于 2015-8-25 16:51
请问微球的补偿效果好吗？说是补偿与电压和荧光相关，我怎么觉得换了细胞补偿也变了啊，那微球岂不是更不 ...

换成细胞，补偿会变 ，但变化不会很大。

小憨

niwanmao 发表于 2013-7-19 09:08
首先，可以采用样本或补偿微球进行调，但似乎补偿微球是不是没这么多颜色 @didi_zhou  @haven_t  
其次，可 ...

补偿微球就是包被抗Ig Fc段抗体的微球，混有空白微球（有的产品是两种微球分开装，有的直接就混在一起了）。所以你需要把你要补偿的抗体加进去，稍微孵育5到10分钟，洗洗上机就行了，非常方便。补偿微球没有自发荧光，可以完全反应荧光素的leak，空白微球是阴性，包被抗体的微球是阳性，两种各50%。当你的某一个检测指标表达丰度特别低，比如NK细胞等，根本看不出阳性阴性的分群，这种情况就特别适合用补偿微球了。
PS：最好买预混好的微球，只要vortex混匀一下，在1.5 mL tube里挤一滴，加点儿抗体，RT 10 min，洗洗上机，谁用谁知道~
另，微球要比细胞小的多，FS和SS电压要调低找，但是荧光通道的电压还是要以细胞为准。

lisa-apple

小憨 发表于 2015-8-26 08:24
补偿微球就是包被抗Ig Fc段抗体的微球，混有空白微球（有的产品是两种微球分开装，有的直接就混在一起了 ...

您好，请问补偿微球最多能放多久？因为不能马上去检测，可能要过个4个小时左右，微球会不会降解了呀？

niwanmao

lisa-apple 发表于 2016-4-26 10:53
您好，请问补偿微球最多能放多久？因为不能马上去检测，可能要过个4个小时左右，微球会不会降解了呀？ ...

4个小时没试过，时间有点长的，即使正常标本染色，4个小时也不太好。

小憨

lisa-apple 发表于 2016-4-26 10:53
您好，请问补偿微球最多能放多久？因为不能马上去检测，可能要过个4个小时左右，微球会不会降解了呀？ ...

我觉得你的微球跟样品一起放着的话，应该不影响结果。实在不能避免放那么久的话尽量4度避光吧

lisa-apple

niwanmao 发表于 2016-4-26 11:19
4个小时没试过，时间有点长的，即使正常标本染色，4个小时也不太好。

嗯嗯谢谢倪老师，后来又重新染了，到检测完成差不多3个小时，小球已经有些降解了不过还是能找到小球

lisa-apple

小憨 发表于 2016-4-26 14:17
我觉得你的微球跟样品一起放着的话，应该不影响结果。实在不能避免放那么久的话尽量4度避光吧 ...

谢谢啦

Victorrwang

1.做7管单个颜色染色，加一管无任何染色的
2.读取数据
3.导入flowjo，自动生成comp matrix

＊如果用的是facs diva的话可以使用diva里面自带的compensation tool