凋亡检测问题

samly0

niwanmao 发表于 2013-8-11 19:56

                               
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看错了，不好意思。

我在想，如果你FSC/SSC设门了，那么36小时AV+7-AAD－和AV+7-AAD+的比例都降 ...

我是先FS/SS设门了，圈出主群，才得的结果。

niwanmao

samly0 发表于 2013-8-12 09:05

                               
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我是先FS/SS设门了，圈出主群，才得的结果。

如果不圈门试试看？

风行

也许是FSC/SSC圈门的时候靶细胞漏掉了

风行

你可以用CFSE/PI或者CFSE/7-AAD来做

samly0

风行 发表于 2013-8-12 21:25

                               
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也许是FSC/SSC圈门的时候靶细胞漏掉了

这种淋巴瘤是一种细胞株，只有一群主群细胞，我用FS/SS只是去除掉碎片而已，所以应该不会漏掉细胞吧，我有空试着不圈门看看

samly0

风行 发表于 2013-8-12 21:25

                               
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你可以用CFSE/PI或者CFSE/7-AAD来做

我没有这么做过，我手里正好也有CFSE，也可以试试，只是我还是想弄清楚用Annexin V/7-AA标记的问题出在哪里，这个组合可以分出早期晚期凋亡，CFSE/PI或者CFSE/7-AAD应该从增殖的角度看的吧，还是我的理解有错误？

niwanmao

samly0 发表于 2013-8-13 09:45

                               
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我没有这么做过，我手里正好也有CFSE，也可以试试，只是我还是想弄清楚用Annexin V/7-AA标记的问题出在哪 ...

我觉得：测凋亡还是用Annexin V/7-AAD吧。CFSE还是不合适。

想来想去，前述的36小时的异常改变应该还是设门上的差异，试试不设门看，应该会有细胞死亡增加的趋势出来。

didi_zhou

你是不是用的反向加药法（时间上，最后一起收来检测），会不会跟培养基的养分有关系？

samly0

didi_zhou 发表于 2013-8-13 15:22

                               
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你是不是用的反向加药法（时间上，最后一起收来检测），会不会跟培养基的养分有关系？ ...

厉害，我是先做48h，再做36h，最后做12h，12h后这三个时间就可以一起上机检测了，因为我们这边流式只有上班时间开放，如果用正向加药法，这三个点没办法都在上班时间内检测

samly0

niwanmao 发表于 2013-8-13 11:25

                               
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我觉得：测凋亡还是用Annexin V/7-AAD吧。CFSE还是不合适。

想来想去，前述的36小时的异常改变应该还是 ...

倪老师，我重新分析了一下，不设FS/SS，分析全部细胞，结果还是那么纠结呢