外周血单个核细胞培养

gaarakang

niwanmao 发表于 2013-8-12 22:17

                               
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你怎么还没看懂我的意思，你最后加刺激剂5小时我明白，我前面一直在说你前面纯粹用培养基＋FBS的5天，对于 ...

恩，谢谢老师！

小憨

gaarakang 发表于 2013-8-12 22:11

                               
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用什么抗体？

比如anti-CD3和CD28来活化T细胞，或者采用更特异性的抗体活化T细胞中的某个亚群

刘星宇

niwanmao 发表于 2013-8-12 22:17

                               
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你怎么还没看懂我的意思，你最后加刺激剂5小时我明白，我前面一直在说你前面纯粹用培养基＋FBS的5天，对于 ...

如果可以，培养公司的细胞株是否好一些，我看到文献养monocyte 细胞株的

晨光下的浪子

我也是分离单个核细胞来培养树突状细胞的，以前都是状态时好时差，但是都达不到老板的要求。现在打算重新采集新鲜血来养，希望能养好吧，不然还不知道要耗多久呢。求各位老师多指点一下树突状细胞培养和检测CD分子的经验！

木石织梦

gaarakang 发表于 2013-8-11 21:56

                               
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现有几个猜想：
1，是否1640放置4度冰箱谷氨酰胺损失严重导致？
2，想加IL-2，但有人说IL-2会诱导T细胞分 ...

我做过T细胞的培养，像你这样的，真的3天都基本凋光了。我觉得可以加IL-2,也可以加CD3CD28。这两种都是非特异的刺激剂。而且，流式检测过，只加这两种的话，Treg只有3% 左右。

月下听蝉

不添加白介2体外直接养，细胞是很容易死的。白介2确实会诱导treg的增殖。体外的PBMC，要培养，要么是短时间内（2~3天内）用1640+FBS搞定，要么长时培养（补加细胞因子）刺激PBMC增殖，否则很容易死掉。另外T细胞体外存活时间过长，T细胞毒素还会杀死其它PBMCs。
如果你是效仿别人的方法做这个细胞因子实验的，你应该参考他们的方法来处理细胞。
至于你怕细胞增殖问题，你可以用CFSE这个染料（绿488）来排查下。

钢蛋儿

木石织梦 发表于 2013-11-15 11:07

                               
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我做过T细胞的培养，像你这样的，真的3天都基本凋光了。我觉得可以加IL-2,也可以加CD3CD28。这两种都是非 ...

对头！加IL-2或者CD3CD28，可以养3~5天没问题的，我们也是这样做的