关于FMO设门问题

木石织梦

niwanmao 发表于 2013-8-16 16:26

                               
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说明书推荐的量只是说明在他们做的条件下，那个量是比较标准的，但在实际中，每个人用的细胞种类不同，条 ...

我看了老师您发的关于滴定的链接，觉得老师您说的有理，但是突然觉得又多了个工作而且不知会不会也想那位楼主那样还是分不清群……？

niwanmao

木石织梦 发表于 2013-8-16 16:34

                               
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我看了老师您发的关于滴定的链接，觉得老师您说的有理，但是突然觉得又多了个工作而且不 ...

分群可能不会相差很多，这个跟细胞本身的表达模式有关，不是抗体浓度所决定的。
滴定，可以使抗体量最优化、染色效果最优化（信：噪比）、非特异性染色体最小化（当然，非特异性染色可能还有其它因素参与，但通过滴定可以把抗体量相关的因素消除掉）。

木石织梦

niwanmao 发表于 2013-8-17 20:43

                               
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分群可能不会相差很多，这个跟细胞本身的表达模式有关，不是抗体浓度所决定的。
滴定，可以使抗体量最优化 ...

所以老师您觉得，我的CD62L分不清群，是因为抗体量还是细胞本身的表达模式？接下来我是该做滴定，还是做同型对照设门？还是说，我还是应该把CD62L-PE这个门的位置往上拉到您说的位置？很晕了，求指导……

niwanmao

木石织梦 发表于 2013-8-19 09:02

                               
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所以老师您觉得，我的CD62L分不清群，是因为抗体量还是细胞本身的表达模式？接下来我是该做滴定，还是做 ...

CD62L本身可能就是这种表达模式。只是我觉得，似乎这个隐约的分界线比你的FMO对照明显上移了，故推测可能是非特异性染色过强引起的。
做滴定还是同型对照其意义不同，滴定是为了优化抗体用量和减少抗体过量导致的非特异性染色过强，而同型对照是为了消除背景。我觉得你这个实验这两个因素都得排除。
我个人的想法是，先从你现在这个用量开始，滴定4个浓度试试，然后看细胞分群和表达强度是否有改变，这样成本应该不高。

木石织梦

niwanmao 发表于 2013-8-19 09:17

                               
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CD62L本身可能就是这种表达模式。只是我觉得，似乎这个隐约的分界线比你的FMO对照明显上移了，故推测可能 ...

好的，谢谢老师，我再试试！