抗体孵育时间及温度对结果的影响

刘星宇

一米阳光Vino 发表于 2013-10-21 15:58

                               
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我们实验室用的孵育条件：4℃、30min，经流式分析后，效果挺好的。我也觉得常温下孵育对细胞可能有伤害（个 ...

谢谢，今天和技术部交流了，分析有可能是因为常温孵育增加了非特异性结合，再等等美国的答复，应该是要改回说明书推荐的条件，也就是4℃孵育40min左右。
我想问下临床的抗体会出现这种问题吗？

niwanmao

刘星宇 发表于 2013-10-21 23:00

                               
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谢谢，今天和技术部交流了，分析有可能是因为常温孵育增加了非特异性结合，再等等美国的答复，应该是要改 ...

我觉得孵育条件不同应该会造成荧光强度的改变，但是对整体的改变应该是相同的。
临床的抗体孵育我们一直用室温15分钟，4℃没试过，但我觉得应该会存在荧光强度上的差别，但临床标本中存在一些正常内参照细胞，而这些细胞和目的细胞的荧光是一起增强的，所以分析时不会存在问题。

一米阳光Vino

niwanmao 发表于 2013-10-21 19:07

                               
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感谢分享经验。不知道你们用的是什么细胞？细胞株还是临床标本？

我们用的新鲜分离的骨髓细胞、脾脏细胞、心脏干细胞和神经干细胞，我们每个人都是按上面的方法操作的。

晨光下的浪子

刘星宇 发表于 2013-9-11 22:02

                               
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嗯，昨晚倪老师也说了4℃孵育30min，与室温孵育15min的效果基本等同。

我在网上查的资料也都说是4℃ 30min，但是我照红细胞裂解液上面的说明书又是室温15min。我也不懂到底是用4℃好还是室温好了，纠结啊……求指教

niwanmao

晨光下的浪子 发表于 2013-11-21 10:35

                               
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我在网上查的资料也都说是4℃ 30min，但是我照红细胞裂解液上面的说明书又是室温15min。我也不懂到底是用 ...

那么你就按照抗体说明书吧。我相信绝大多数抗体在室温15分都是很好的结果。4℃30分钟我是没试过，至少临床标本还是需要快速，所以我选择前者。

晨光下的浪子

niwanmao 发表于 2013-11-21 12:10

                               
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那么你就按照抗体说明书吧。我相信绝大多数抗体在室温15分都是很好的结果。4℃30分钟我是没试过，至少临 ...

嗯，谢谢倪老师的指导。因为我买的HLA-A2抗体的说明书上面都没有试验步骤，在联科的红细胞裂解液说明书上面有，然后结合了网上的资料，所以就大概试了一下。但是我前天做的时候在室温下也孵育了半个小时，不知道会不会增加非特异性染色呢？会不会导致假阳性啊？我也只是想检测样本是否是HLA-A2阳性的。求指教

钢蛋儿

关注中。。我们实验室的临床标本和细胞系一直是室温孵育，，

niwanmao

晨光下的浪子 发表于 2013-11-21 17:51

                               
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嗯，谢谢倪老师的指导。因为我买的HLA-A2抗体的说明书上面都没有试验步骤，在联科的红细胞裂解液说明书上 ...

非特异性染色、假阳性，光在这里说说、推测一下，谁都说不出来，而是需要通过你对自己做的标本的了解、通过对流式图形形状的分析，才能看出来。例如你做了同型对照，marker设置在10E2位置，然后做了某标本，右侧界限在10E3，此时，如果这个标本你能够确定它是表达阴性的，那么就说明是假阳性或存在明显的非特异性染色。

曹宁

pushiming77 发表于 2013-09-13 23:05:16

                               
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一些资料显示，细胞在PBS里，4℃可以存活10h，在常温下只能存活4h，所以细胞提取实验，我们大多在冰上操

想咨询下老师，这个细胞在不同温度下存活时间的文献出处

可爱朱古力tutu

niwanmao 发表于 2013-9-14 13:11
抗体的结合应该跟布朗运动无关吧？

科研标本错综复杂，一句话说不准。

倪老师，是室温好还是37度好呢？实验室老师说裂红时放置在37度下，我做出来假阳性率很高， 我不确定是不是温度的原因