求教小球的问题

niwanmao · 发表于 2013-10-23 20:32:29

dragonhzqsmmu 发表于 2013-10-23 18:56

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请教各位老师，我想用1um微球（不带荧光标记）来设定microparticles的上界，用的是invitrogen的1umlatex微 ...

你不能用PBS重悬，应该用去离子水才行，一般合成的微球遇到含离子的溶液容易聚集。

dragonhzqsmmu · 发表于 2013-10-24 09:23:16

niwanmao 发表于 2013-10-23 20:32

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你不能用PBS重悬，应该用去离子水才行，一般合成的微球遇到含离子的溶液容易聚集。 ...

那我加到血清里面怎么处理？是指我能否先做一管去离子水加微球的做标定，再做一管血清的，最后做一管血清加微球的？
用去离子水去稀释微球的话用vortex分散够不？还是一定要用超声分散？

多谢

niwanmao · 发表于 2013-10-24 09:32:10

dragonhzqsmmu 发表于 2013-10-24 09:23

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那我加到血清里面怎么处理？是指我能否先做一管去离子水加微球的做标定，再做一管血清的，最后做一管血清 ...

用去离子水配制的话，直接振荡看看效果吧。

dragonhzqsmmu · 发表于 2013-10-28 19:56:58

niwanmao 发表于 2013-10-24 09:32

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用去离子水配制的话，直接振荡看看效果吧。

根据老师的建议用去离子水效果好多了，0.5um的我用的是sigma的带荧光标记的微球，1um的是invitrogen的不带荧光的微球，不知道这样标记对不对，里面的MPs门是否就是microparticles 0.5-1um的范围？

niwanmao · 发表于 2013-10-28 20:08:48

dragonhzqsmmu 发表于 2013-10-28 19:56

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根据老师的建议用去离子水效果好多了，0.5um的我用的是sigma的带荧光标记的微球，1um的是invitrogen的不 ...

FSC怎么跨度这么大呢？

dragonhzqsmmu · 发表于 2013-10-28 20:58:45

niwanmao 发表于 2013-10-28 20:08

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FSC怎么跨度这么大呢？

这个因为做的是微粒，直径在0.5um到1um之间，比细胞小很多，所以用的是对数轴

niwanmao · 发表于 2013-10-28 21:48:03

dragonhzqsmmu 发表于 2013-10-28 20:58

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这个因为做的是微粒，直径在0.5um到1um之间，比细胞小很多，所以用的是对数轴 ...

我的意思是说1um的微球这么集中，为什么0.5um的微球FSC坐标这么分散？

dragonhzqsmmu · 发表于 2013-10-28 21:54:37

niwanmao 发表于 2013-10-28 21:48

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我的意思是说1um的微球这么集中，为什么0.5um的微球FSC坐标这么分散？

这个我也不清楚，1um的微球是基本上做这个实验都推荐的，0.5um的则是我看到有文献提到的具体的货号买的，而且这个0.5um的微球其实主要是用来做细胞吞噬追踪用的，当然也有人用它来定MP的下限，我用dd水稀释后来看的话vortex以后0.5um的好像是分两群，我图里面标记的上面还有一小群，可能是微球形成的二聚体，确实没有1um微球那么集中，是不是我用的浓度太大了，我是0.5ul微球稀释到2mldd水里面的

niwanmao · 发表于 2013-10-28 22:03:34

dragonhzqsmmu 发表于 2013-10-28 21:54

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这个我也不清楚，1um的微球是基本上做这个实验都推荐的，0.5um的则是我看到有文献提到的具体的货号买的， ...

管路会不会有点脏？

dragonhzqsmmu · 发表于 2013-10-28 22:32:03

本帖最后由 dragonhzqsmmu 于 2013-10-28 22:38 编辑

niwanmao 发表于 2013-10-28 22:03

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管路会不会有点脏？

这个不好意思，应该是比较脏，我跑dd水的样本，出来的信号也比较多，这个大清洗一下，反复冲洗会好点吗？之前跑细胞问题不大，跑MP的话背景比较高，另外我们用的是国产的流式管，感觉质控方面做得没有BD原装的好，塑料材质一般，做这种MP的实验是否最好改用进口的管子减小背景？

顺便向老师求一下管路彻底清洗的protocol

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