为什么检测细胞增殖的时候很多protocol中染完Brdu还要再染PI？

niwanmao

椴树 发表于 2014-9-29 17:54
老师传啦，第32页说了调节补偿

从激发、发射波长来说，7-AAD和PI确实靠的很近，所以虽然说7-AAD在FL3检测，但实际在FL2应该也能激发和检测，只是效率可能不高，所以还是得稍微调一下。

niwanmao

椴树 发表于 2014-9-29 17:10
是DNase，为了暴露Brdu。还有一点BD的kit（NO.559619）上说7AAD需要和FITC调节补偿，但是7AAD用callibur ...

DNAse我个人总觉得应该省去，实在想不通为了暴露位点而用DNAse。

椴树

niwanmao 发表于 2014-9-29 20:47
从激发、发射波长来说，7-AAD和PI确实靠的很近，所以虽然说7-AAD在FL3检测，但实际在FL2应该也能激发和检 ...

老师，不是啊，是说7-AAD和FITC要调节补偿。

niwanmao

椴树 发表于 2014-9-30 10:04
老师，不是啊，是说7-AAD和FITC要调节补偿。

你没理解我说的意思，正是因为7-AAD和PE的激发、发射光谱如此接近，而PE和FITC需要调节补偿，所以7-AAD与FITC之间也需要调。

椴树

niwanmao 发表于 2014-9-30 18:24
你没理解我说的意思，正是因为7-AAD和PE的激发、发射光谱如此接近，而PE和FITC需要调节补偿，所以7-AAD与 ...

可是老师callibur怎么调节啊？参数里只有FL1和FL2之间能调补偿啊，FL1和FL3流式的老师也没找到在哪里调节补偿啊

niwanmao

椴树 发表于 2014-10-22 10:57
可是老师callibur怎么调节啊？参数里只有FL1和FL2之间能调补偿啊，FL1和FL3流式的老师也没找到在哪里调节 ...

那就调节FL1和FL2的。

椴树

niwanmao 发表于 2014-10-22 15:16
那就调节FL1和FL2的。

可是我用的是FL1（FITC）和FL3（7-aad）通道啊

facetodog

个人做BrdU检测的一点感受：
1、加PI时可以利用PI区别出细胞周期（如说明书的示意图），便于后期分析在哪一期增值增多，甚至可以有SUBG1期；
2、可以通过对PI的A-W分析设门去除粘连体；
3、如果BrdU使用的是FITC的抗体，尽量改用7-AAD染核或者用7-aad/percp的通道（即四色流式里FL3）检测PI，或者其他的染核燃料，以避免调节补偿导致的诸多麻烦；
4、在一组样品分析中，每一管都要对PI/7-AAD和BrdU-FITC的峰值位置进行尽可能精确的调节，以便之后分析时可以批量处理；
5、检测前，准备足够的细胞以便每一管的调节，样品处理应在尽可能短的时间里完成破膜固定处理，并且抗体的浓度应稀释到最适合，离心过程时避免丢失并且洗涤干净，标记完成后立即上机检测

facetodog

椴树 发表于 2014-10-25 10:46
可是我用的是FL1（FITC）和FL3（7-aad）通道啊

几乎无需调节，但要注意两个通道电压的调节。在无补偿跟随的机器上检测，尽量避免补偿

椴树

facetodog 发表于 2014-10-25 11:30
个人做BrdU检测的一点感受：
1、加PI时可以利用PI区别出细胞周期（如说明书的示意图），便于后期分析在哪一 ...

如果用的是FITC（FL1）和7AAD（FL3），我应该怎么去除 粘连体呢？第二个为什么不需要RNase处理啊