FLOWJO做图，怎么调不好

niwanmao

20071271 发表于 2013-10-24 09:31

                               
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怎么才能把补偿调好（用FLOWJO），怎样才算好？

基本原则是应该使阳性和阴性两群细胞的mfi基本在一条水平线上。但是你这里的细胞分不开两群，故没法用这个准则来判断，但无论如何，细胞大部分到了坐标轴外面，这调节肯定是有问题的。

补偿的调节详见：http://www.flowcyto.cn/bbs/reade ... fkVsa9PhZK1I8vmx4NU

20071271

niwanmao 发表于 2013-10-24 09:40

                               
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基本原则是应该使阳性和阴性两群细胞的mfi基本在一条水平线上。但是你这里的细胞分不开两群，故没法用这 ...

能不能讲一下具体用FLOWJO或者其他什么软件怎么调？

niwanmao

20071271 发表于 2013-10-24 09:58

                               
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能不能讲一下具体用FLOWJO或者其他什么软件怎么调？

在windows菜单下打开open compensation window，教程参见：http://www.flowjo.com/v9/html/compensation.html

xiaokangkang

不会调补偿，想学习学习！

20071271

niwanmao 发表于 2013-10-24 12:14

                               
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在windows菜单下打开open compensation window，教程参见：http://www.flowjo.com/v9/html/compensation. ...

我感觉，自动wizard调不好，手动更没有谱

niwanmao

20071271 发表于 2013-10-24 12:50

                               
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我感觉，自动wizard调不好，手动更没有谱

标准的做法是同型对照标本、各通道单阳性标本数据拖到那个窗口，让软件计算。如果你了解你要研究的标本其大概表达情况，可以自己手动调节，这还是有谱的。

20071271

niwanmao 发表于 2013-10-24 14:39

                               
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标准的做法是同型对照标本、各通道单阳性标本数据拖到那个窗口，让软件计算。如果你了解你要研究的标本其 ...

看来这还是一个技术活，这能这样了

20071271

niwanmao 发表于 2013-10-24 14:39

                               
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标准的做法是同型对照标本、各通道单阳性标本数据拖到那个窗口，让软件计算。如果你了解你要研究的标本其 ...

你看，图a是我这调的，我看还需要要怎么调才能调到图b的样子？
图1是自动调的

niwanmao

20071271 发表于 2013-10-27 10:51

                               
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你看，图a是我这调的，我看还需要要怎么调才能调到图b的样子？
图1是自动调的
...

没有阳性细胞群，怎么调都调不成图b那样。会不会是抗体浓度或抗体质量问题？你做什么标记？

20071271

niwanmao 发表于 2013-10-27 20:07

                               
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没有阳性细胞群，怎么调都调不成图b那样。会不会是抗体浓度或抗体质量问题？你做什么标记？ ...

我用FITC和PE标记。
抗体浓度和质量应该没有问题，之前我做过单染。