ConA刺激小鼠细胞流式检测方案

liyi881228

你好，你能不能发给我一下PMA刺激检测INF-r的具体步骤啊，我最近做的实验加PMA+BFA的CD4+INF-r+比例为55.3%，只加BFA的CD4+INF-r+比例为54.6%，我觉得好奇怪呀

冰澈澄溪

比例也太高了 我估计你是流式分析的时候，划十字门有问题吧。 我们做INTRO是提取小鼠的肺跟脾组织里边淋巴细胞。

以梦为x马

比如用PMA和离子霉素刺激CD4+T细胞，通过抗IL-17染色来检测TH17细胞，这个PMA是促使 本来TH17细胞分泌更多的IL-17还是促使CD4+T细胞分化更多的TH17？

niwanmao

以梦为x马 发表于 2015-1-25 10:00
比如用PMA和离子霉素刺激CD4+T细胞，通过抗IL-17染色来检测TH17细胞，这个PMA是促使 本来TH17细胞分泌更多 ...

PMA主要是活化细胞，促进分泌，而不是分化。

zxtzq526

niwanmao 发表于 2013-11-3 20:19
【从Center for Immunology，Department of Lab Medicine & Pathology，University of Minnesota的主页翻译 ...

老师你好，最近在做ConA刺激淋巴细胞增殖实验，镜下看到细胞明显增殖，但流式抗体染色效果不好，不知是否没有打散成单细胞，导致细胞染不上色，收细胞时需要用什么消化一下吗？

niwanmao

zxtzq526 发表于 2016-12-12 19:07
老师你好，最近在做ConA刺激淋巴细胞增殖实验，镜下看到细胞明显增殖，但流式抗体染色效果不好，不知是否 ...

是否已打散成单细胞，可通过FSC-A/FSC-H散点图看看。你做的是淋巴细胞，不需要消化呀

zxtzq526

niwanmao 发表于 2016-12-12 20:55
是否已打散成单细胞，可通过FSC-A/FSC-H散点图看看。你做的是淋巴细胞，不需要消化呀 ...

我就是不知道为何ConA刺激后细胞就染上流式抗体的比例就很少，对照组是正常的，还望老师指教。

niwanmao

zxtzq526 发表于 2016-12-13 10:08
我就是不知道为何ConA刺激后细胞就染上流式抗体的比例就很少，对照组是正常的，还望老师指教。 ...

做的是什么指标？

zxtzq526

niwanmao 发表于 2016-12-13 12:42
做的是什么指标？

做的就是CD3，CD4，CD8，T淋巴细胞大亚群

niwanmao

zxtzq526 发表于 2016-12-14 10:40
做的就是CD3，CD4，CD8，T淋巴细胞大亚群

PMA是会导致一些标本CD4荧光强度降低，但有些人反映不会。所以你可以破膜之后，再染CD3、CD4、CD8试试。