ConA刺激小鼠细胞流式检测方案

zxtzq526

niwanmao 发表于 2016-12-14 15:29
PMA是会导致一些标本CD4荧光强度降低，但有些人反映不会。所以你可以破膜之后，再染CD3、CD4、CD8试试。 ...

老师，我用的是ConA刺激的，还有其他蛋白刺激，也有平行培养的不加刺激对照，除了ConA刺激的细胞外，都可以很好的染上CD3、CD4、CD8抗体，这3个是细胞表面标记，应该不用做破膜处理吧。

niwanmao

zxtzq526 发表于 2016-12-14 16:59
老师，我用的是ConA刺激的，还有其他蛋白刺激，也有平行培养的不加刺激对照，除了ConA刺激的细胞外，都可 ...

你可能破膜试试，可能是刺激后像PMA刺激似的发生内吞了。

crystallee89100

倪老师，您好！您这篇帖子解决我一个很大的问题。另外还想请教您，我们是体内干预后取出小鼠脾脏细胞做多色流式，加ConA做胞内因子分泌的阳性对照，这种情况下，应该加入ConA多大浓度、多长时间比较合适呢？急盼复，谢谢倪老师！

niwanmao

crystallee89100 发表于 2017-10-11 14:45
倪老师，您好！您这篇帖子解决我一个很大的问题。另外还想请教您，我们是体内干预后取出小鼠脾脏细胞做多色 ...

取出小鼠脾脏后，制备单个细胞悬液，使其浓度为 1 x 10^5/ml，在96孔板中每孔种入250ul，大多数ConA的终浓度是5ug/ml，可通过每孔加入50ul含ConA的细胞培养基（RPMI 1640，2mM L-Glutamine，10% FBS，30ug/ml ConA ）即可获得此终浓度。

meteorlasting

最开始的问题不是要使用ConA刺激细胞测细胞意因子吗，我也有这个需求，但是后面怎么答非所问啊？
那个步骤好像是刺激细胞扩增的，细胞浓度用的2.5x10^6，比正常PMA刺激时的1x10^6高了好多，而且ConA刺激48h，这个时间太长了吧？感觉如果照上面的方法测细胞因子，可行性并不高啊。至于ConA的浓度，这个买ConA回来的说明书上有，也不需要太担心。

meteorlasting

niwanmao 发表于 2013-11-3 20:19
【从Center for Immunology，Department of Lab Medicine & Pathology，University of Minnesota的主页翻译 ...

最开始的问题不是要使用ConA刺激细胞测细胞意因子吗，我也有这个需求，但是后面怎么答非所问啊？
那个步骤好像是刺激细胞扩增的，细胞浓度用的2.5x10^6，比正常PMA刺激时的1x10^6高了好多，而且ConA刺激48h，这个时间太长了吧？感觉如果照上面的方法测细胞因子，可行性并不高啊。至于ConA的浓度，这个买ConA回来的说明书上有，也不需要太担心。然后不知道该怎么做了

niwanmao

meteorlasting 发表于 2017-11-22 11:44
最开始的问题不是要使用ConA刺激细胞测细胞意因子吗，我也有这个需求，但是后面怎么答非所问啊？
那个步 ...

刺激完了，不就可以收集细胞测胞内细胞因子，或者测血清中的细胞因子吗？

cecily

niwanmao 发表于 2017-11-22 14:58
刺激完了，不就可以收集细胞测胞内细胞因子，或者测血清中的细胞因子吗？ ...

老师，您好！我想请教一下，我用ConA/PHA做阳性对照组，过敏原蛋白做实验组。人的PBMC增殖最好用PHA，小鼠用ConA吗？人的PBMC增殖能否用ConA呢？另外，我想刺激以后看T的增殖情况，一般是要刺激5-7天，这种需要在开始的时候就加IL-2吗？我看我师姐的protocol是不加IL-2就测增殖了。另外，我和她做都发现镜下看细胞成团增殖了，但是上机做CFSE或者EdU测都是单峰，是因为没有加IL-2吗？如果我再标记CD3+和Ki-67看T细胞增殖能力可以吗？

niwanmao

cecily 发表于 2019-7-4 14:14
老师，您好！我想请教一下，我用ConA/PHA做阳性对照组，过敏原蛋白做实验组。人的PBMC增殖最好用PHA，小 ...

你问的问题太笼统，建议站内依次搜索以下关键词：
增殖
CFSE

还有昨天发表的这篇帖子：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-7658-1-1.html