胞内染色问题

liliqianyi

niwanmao 发表于 2013-11-12 19:33

                               
登录/注册后可看大图

分选我倒没做过，在平时我们做免疫分型的经验，一般增加两个数量级的话，而染色体积不变（100ul），此时 ...

嗯  好的谢谢倪老师  近期会做个浓度梯度  有好的结果再和大家分享

钢蛋儿

和楼主的流式步骤全过程都神似！我和楼主一样，也是用的fixation and permeabilization (permeabilization kit,eBioscience)室温孵育20分钟，记得说明书上写的是同样适用于其它胞内因子的破膜。结果IL-17只有很少才染上……老师说是破膜后的转速要调的比破膜前低一些，还有破膜时间降至15分钟，我有点迷茫了……

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2013-11-17 17:28

                               
登录/注册后可看大图

和楼主的流式步骤全过程都神似！我和楼主一样，也是用的fixation and permeabilization (permeabilization  ...

没这种说法啊。IL-17检测的阳性率低得考虑多种原因：破膜剂、试剂、标本、步骤等因素，只有逐一排除。

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2013-11-17 19:11

                               
登录/注册后可看大图

没这种说法啊。IL-17检测的阳性率低得考虑多种原因：破膜剂、试剂、标本、步骤等因素，只有逐一排除。 ...

不过以上是我们延续师兄的做法，IL-17检测的阳性率一直很低……
听倪老师一说，我是该好好反思下了！

Kimbryant

钢蛋儿 发表于 2013-11-17 17:28
和楼主的流式步骤全过程都神似！我和楼主一样，也是用的fixation and permeabilization (permeabilization  ...

每管加多少量的固定破膜液20分钟啊

niwanmao

Kimbryant 发表于 2014-6-17 07:06
每管加多少量的固定破膜液20分钟啊

每种固定破膜剂不一样，按照说明书来吧，一般按照说明书问题不大。
我自己使用下来比较好的固定破膜剂是caltag fix&perm（现为life的产品，记得是100ul）、beckman perfix nc（既可做核内，也可做胞内，三个组分，按说明书使用，也可 减量）。

钢蛋儿

Kimbryant 发表于 2014-6-17 07:06
每管加多少量的固定破膜液20分钟啊

倪老师书说得对，按说明书就行~~牌子不一样用法也不尽相同的

didi_zhou

niwanmao 发表于 2014-6-17 18:57
每种固定破膜剂不一样，按照说明书来吧，一般按照说明书问题不大。
我自己使用下来比较好的固定破膜剂是ca ...

一上来就教人家减量啊……先按正常量做出来再说嘛。

niwanmao

didi_zhou 发表于 2014-6-19 18:29
一上来就教人家减量啊……先按正常量做出来再说嘛。

{:soso_e141:}因为我们深知研究生的心里都是想着省钱{:soso_e112:}

Kimbryant

niwanmao 发表于 2014-6-17 18:57
每种固定破膜剂不一样，按照说明书来吧，一般按照说明书问题不大。
我自己使用下来比较好的固定破膜剂是ca ...

说明书上是1ml吗？用100微升可以吗