为何同型对照管表达阳性？

一丁点儿

niwanmao 发表于 2013-12-10 21:58
如果你确定你的操作都是一模一样，我觉得也只能认为是仪器的管路问题，可能是比较，也可能是流动室问题。 ...

操作步骤都是一样的，都是我一个人按照之前写下来的步骤一步一步的做的，不过可能就是各种细节上有细微的差别。之前实验室的老师也不知道是什么原因，不过他昨天告诉我说PE-CY7通路可能有问题，他说申请叫仪器公司那边的人过来看看，不过说至少要半个月之后才能来。。。所以，现在也不知道是什么问题，很感谢老师的帮助，等仪器公司那边来人检修看看，有结果我再来发帖，嘿嘿

一丁点儿

niwanmao 发表于 2013-12-10 21:58
如果你确定你的操作都是一模一样，我觉得也只能认为是仪器的管路问题，可能是比较，也可能是流动室问题。 ...

不过，老师，我还有个问题请教下，在上机的时候，除了可以改变FSC和SSC的电压，我想问问，比如PE、APC、PE-CY7这些的电压可以改变吗？如果改变了，会不会影响补偿？我现在得到了几个老师的不同的观点。。。越来越糊涂了。。。

niwanmao

一丁点儿 发表于 2013-12-10 22:14
不过，老师，我还有个问题请教下，在上机的时候，除了可以改变FSC和SSC的电压，我想问问，比如PE、APC、P ...

FSC、SSC的电压改变，只是改变细胞的物理学分群，不会影响荧光的补偿，但PE/APC/PE-CY7等荧光的电压改变，补偿肯定会影响，但影响多少，得看你改变的幅度有多大。

你前面说那个做流式的老师说PE-CY7通道坏了，但是为什么12月2日的结果这么好？

一丁点儿

niwanmao 发表于 2013-12-10 22:17
FSC、SSC的电压改变，只是改变细胞的物理学分群，不会影响荧光的补偿，但PE/APC/PE-CY7等荧光的电压改变 ...

是啊，是实验室管流式细胞仪的老师说的，我也不能理解为什么实验结果就是这样忽好忽坏。昨天我问他，为什么他知道PE-CY7通路有问题，他没有回答我，因为他也是说的可能有问题。今天去做流式，发现同型对照管的阴性群又跑到10的四次方那个位置去了，无奈我只能调PE、APC、PE-CY7电压，把细胞赶到了大概10的二次方的位置。之前老师说不能动这些荧光素标记的电压。。。可是这种情况。。。。
另外，有个老师说，每次做都要调整各种电压，以保证同型对照的阴性群在10的二次方内。。。
对于这两种不同的观点，我实在是不知道应该怎么做了

niwanmao

一丁点儿 发表于 2013-12-10 22:26
是啊，是实验室管流式细胞仪的老师说的，我也不能理解为什么实验结果就是这样忽好忽坏。昨天我问他，为什 ...

只能说，你们的机器不稳定，老了。

一丁点儿

niwanmao 发表于 2013-12-10 22:38
只能说，你们的机器不稳定，老了。

机器才3年零一个月

ypfbluesky

FoxP3管和同型对照管的荧光值完全一样吗？会不会这次的荧光值比上次实验的高，而仍然使用了上次的电压和模板，导致同型对照组上次的电压下显示阳性？

一丁点儿

ypfbluesky 发表于 2013-12-12 13:34
FoxP3管和同型对照管的荧光值完全一样吗？会不会这次的荧光值比上次实验的高，而仍然使用了上次的电压和模 ...

我没有比较测定管和对照管的荧光值，也不知道该如何比较。。。另外，也不是很明白您说的比上次荧光值高的意思。但是，我在上机的过程中只调了FSC和SSC，老师说其他的电压是不能动的。。。但是，也有老师说可以改变其他荧光素的电压。。。。所以。。。

niwanmao

一丁点儿 发表于 2013-12-12 20:35
我没有比较测定管和对照管的荧光值，也不知道该如何比较。。。另外，也不是很明白您说的比上次荧光值高的 ...

按我们平时做免疫分型的经验来说，条件设置好了，一般不轻易变动，除非标本因特殊原因造成荧光过弱才会做微调。

对于你们科研标本来说，不同类型的标本，是可以进行调节的，但如果同种类型（如同种细胞株来源）的，建议还是尽可能用一样的条件，以保证结果的可比性。

一丁点儿

niwanmao 发表于 2013-12-12 21:14
按我们平时做免疫分型的经验来说，条件设置好了，一般不轻易变动，除非标本因特殊原因造成荧光过弱才会做 ...

谢谢老师的回复，那我还想问问你说的不同类型的标本，不同种细胞株算不同类型标本，那对于不同的白血病患者，算不同类型的标本吗？急淋和急非淋算不同类型的标本吗？白血病和ITP的算不同类型的标本吗？再次表示感谢！