BD流式液相多重蛋白定量技术（CBA）使用手册

evadj86

niwanmao 发表于 2013-12-5 09:02

                               
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@evadj86  你们单位在做这个吗？能不能给我们讲解一下这个东西的使用和解读？谢谢！  ...

倪老师您言重了！这是别人给我的一张图，据说BD官网有，我自己只做过一次ICAM-1、VCAM-1的检测，才两种因子。

针对那张图：
Flex set 微球是带有两种荧光，图上FL-3、FL-4指的是在流式细胞仪的 FL3 和 FL4 通道检测，通过这两个二维矩阵来对捕获微球定性，PE 检测抗体在 FL2 通道来对目的蛋白定量。图上1-9和A-F是指的每种因子的固定位置，比如C2，就是从上到下（A-F）第三行，从左到右（1-9）第二列，两者交叉对应的那点位置。我们买CBA试剂FLEX SET后面都有一个（Bead 字母+数字）就是指的这个位置。做的因子少还好，做的因子多了这个图就很重要了，有时候跑出来的荧光会重合，得根据这个调开分辨因子。

我也不知道我说的是不是都正确，最近我们也打算做人THI/TH2细胞因子（CBA）检测，但试剂还没到货，大家一起学习吧。附上CBA的一个概述供参考，里面把信号接收说的很详细。

evadj86

niwanmao 发表于 2013-12-5 09:02

                               
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@evadj86  你们单位在做这个吗？能不能给我们讲解一下这个东西的使用和解读？谢谢！  ...

还有，calibur上跑不出来这个图，这个是所有微球都上跑出来的，calibur处理不来这么多

niwanmao

evadj86 发表于 2013-12-5 20:13

                               
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倪老师您言重了！这是别人给我的一张图，据说BD官网有，我自己只做过一次ICAM-1、VCAM-1的检测，才两种因 ...

这么多微球显示在那里，如何定量啊？象Th1/Th2 CBA试剂盒是根据FL2的荧光强度从标准曲线上计算出对应的浓度，象这个图如果某个因子一增强，不是跟其它因子要重叠了？

evadj86

niwanmao 发表于 2013-12-5 20:49

                               
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这么多微球显示在那里，如何定量啊？象Th1/Th2 CBA试剂盒是根据FL2的荧光强度从标准曲线上计算出对应的浓 ...

不管SET还是KIT需要检测的物质都是PE标记的，都是由软件分析的FL-2的荧光强度/浓度。这个图是理想状态吧，一般都很难达到，您说的是对的，一般做的时候选择的因子尽量分的开、距离够大，否则应该是不好调的

flow

这图也忒牛了，领教啦！

huoguang980789

BD的CBA分两种，有成品的kit，双色就可以了，绝大部分机器都能正常使用，不同的大小的微球捕获不同的因子，通过标准品的梯度稀释来处理标准曲线，然后用个免费软件进行曲线和浓度分析。Set就是自己选择因子，然后配上Buffer kit，等同于kit，不过set是三色的，所以有的机器是不能用的，微球上有两个颜色做定位用，其他就跟kit一样了。如果检测因子多的话，整体并不贵，比elisa便宜，而且样品量很小，50ul就够了