有谁用未裂解的全血细胞检测CD3，CD4和CD8，求方法或相关...

小呆

dragonhzqsmmu 发表于 2013-12-16 18:36
裂解后有没有洗涤样本？是小鼠的全血吗？20ul的体积是否太小了？

我们做最小做过50ul的，再小感觉数据波 ...

裂解后用PBS洗涤了2次，最后吸弃上清液，然后加入350ulPBS，然后上样！

20ul的全血和2.5ul的抗体。。。。。。是全血少了？还是进样体积（约30ul）小了，我跑了5000个细胞                                 你们说的体积，是全血的体积还是进样体积，或是跑的细胞数目少了？

小呆

niwanmao 发表于 2013-12-16 21:13
应该还是你获取的细胞数量太少有关，所以结果波动会比较大，建议你全血用量可以大一些。

至于计算，象你 ...

20ul的全血和2.5ul的抗体。。。。。。是全血少了？还是进样体积（约30ul）小了，我跑了5000个细胞                                 你们说的体积，是全血的体积还是进样体积，或是跑的细胞数目少了？

你说的获取细胞数量少，还有建议我全血用量大一些，意思是不是全血与抗体孵育时，多用一些全血，并且多获取一些细胞数量？
如果全血的量不变，我选择多获取一些细胞数量（因为5000个细胞进样体积也就30ul），例如获取25000的数量，那么是不是可以？

小呆

niwanmao 发表于 2013-12-16 15:38
如果测淋巴细胞亚群，肯定得裂解，不裂解的话淋巴细胞容易受红细胞及其碎片干扰，无法排除。

至于您说的裂 ...

我还做过一个预试：只圈定CD3，然后跑了5000个，随之进样体积也增大，然后通过换算得到的每ml的细胞数量和整体细胞跑了5000个的细胞数量相差不大，这样如何解析？
还有就是想知道你知道用未裂解的全血做流式具体方法如何做，除了红细胞与细胞碎片有影响外，我上面的圈门是否正确。
红细胞和细胞碎片影响的原因具体是有哪些？是非特异性染色比较多还是其他原因，从而造成数据不稳定？

感谢你的回答！

dragonhzqsmmu

小呆 发表于 2013-12-17 08:22
我还做过一个预试：只圈定CD3，然后跑了5000个，随之进样体积也增大，然后通过换算得到的每ml的细胞数量 ...

我们也是用的裂红的血细胞跑的，不过是在老的Cailubr上进行的，个人觉得是全血的体积有点小，因为Calibur进样还要考虑进样一瞬间的吸样损伤，所以我们的标本全血原始体积控制在40ul以上，Guava因为有个微流式细胞分析的优点这样比我们强多了


另外LZ的小鼠采血也是从隐静脉\下颌静脉采的吗？还是用的断尾采血的？后者因为考虑到组织间液的渗出可能计数不是太准确

有咨询过millipore这方面的技术支持吗？他们可能更加的专业

niwanmao

小呆 发表于 2013-12-17 08:05:53

                               
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20ul的全血和2.5ul的抗体。。。。。。是全血少了？还是进样体积（约30ul）小了，我跑了5000个细胞      

搞了半天你没有把标本取完啊-_-||<br />
要取完的，尽量全部取光

niwanmao

小呆 发表于 2013-12-17 08:22:50

                               
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我还做过一个预试：只圈定CD3，然后跑了5000个，随之进样体积也增大，然后通过换算得到的每ml的细胞数量

不裂解的话，红细胞以及碎片对淋巴细胞非常大，不是一般的大