关于凋亡十字门的问题

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2014-3-1 20:42
最近陆续见到数篇没有标记CD3的文章，发表的杂志也蛮好，特此汇报一下，请各位老师指点………… ...

嗯，找到参考的当然最好（PS：J Immunol那篇有CD3，只是没用来设Th17的门）。

我个人觉得加CD3最好，因为CD4在单核细胞中也会表达。尽管单核细胞的CD4表达较淋巴细胞弱，但有时候科研标本经过某些处理后，不排除CD4发生荧光降低，导致分群不好。不过以上纯粹是我个人看法，不代表不加就不对。因为，平时对于Treg可能用的最多的方案还是CD4、CD25、FoxP3/CD127，不含CD3，也是公认的。

facetodog

1.你这样做跟你题目说的检测早期凋亡不符，建议加标7-aad区分下早晚期凋亡
2.CD4+CD25+的门化得偏下，上方明显有一小团双阳细胞群，说明你双阳率大致就那么多
3.双阳的门圈出来之后第三个图的纵坐标直接用侧向ssc就行了，界定凋亡细胞阴阳性的划线不必十字线，拉下来区分左右就行，以正常对照组为标准，活细胞应该是一团，右侧为凋亡细胞

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2014-3-1 21:20
嗯，找到参考的当然最好（PS：J Immunol那篇有CD3，只是没用来设Th17的门）。

我个人觉得加CD3最好，因为 ...

恩恩，谢谢倪老师

leosurely

lin850424 发表于 2014-2-7 19:08
因为是淋巴细胞养了几天，所以正常细胞组也有凋亡了啊，这个暂且不说，但是根据正常细胞画好的门，在实验 ...

这个也是我经常遇到的问题，特别是检测贴壁细胞的凋亡，实验组的细胞阴性峰往往会向右偏移，而且凋亡越高的组偏移越厉害，理论上电压和门是根据正常组细胞调的是不能再动的，但这样得到的图往往阴性峰的一部分就会划入阳性范围内，给人的直观感觉就是门画的不对。请问大家是如何解决这个问题的？如果要保持门的位置不变，电压就要调小点。如果电压保持不变，门的位置就要向右移。遇到这样的标本，真是左右为难。

niwanmao

leosurely 发表于 2014-03-17 22:44:02

                               
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这个也是我经常遇到的问题，特别是检测贴壁细胞的凋亡，实验组的细胞阴性峰往往会向右偏移，而且凋亡越高

真有偏移，还是建议移动十字门，因为阴性对照其实更重要的作用是确定电压范围，而不是设门

susu

leosurely 发表于 2014-3-17 22:44
这个也是我经常遇到的问题，特别是检测贴壁细胞的凋亡，实验组的细胞阴性峰往往会向右偏移，而且凋亡越高 ...

我们也经常遇到这种问题，我之前跟美天尼的一个技术支持讨论过，她的意见也是不要动电压，而是根据细胞分布画门。但现在很多学生不懂，或者他们的老板不懂，非说是我们分析的不好，要求我们必须要十字门画的位置和对照组一致，对于这样的人，我的做法是道理告诉他，画线标准告诉他，他还是坚持的话我就动电压。

钢蛋儿

susu 发表于 2014-3-20 16:03
我们也经常遇到这种问题，我之前跟美天尼的一个技术支持讨论过，她的意见也是不要动电压，而是根据细胞分 ...

学习了~~

钢蛋儿

facetodog 发表于 2014-3-1 22:24
1.你这样做跟你题目说的检测早期凋亡不符，建议加标7-aad区分下早晚期凋亡
2.CD4+CD25+的门化得偏下，上方 ...

这么看楼主的CD25也染得不好……一小团

facetodog

钢蛋儿 发表于 2014-3-23 09:38
这么看楼主的CD25也染得不好……一小团

看起来还行

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2014-2-12 22:32
以后电压一般不变，由于我们分析的主要指标是ANNEXIN V FITC，本来需要设置管2或管4做FMO对照，但由于ANNE ...

马上要测增殖（Ki-67）了，想问下增殖是不是也想Annexin-v一样分群清楚？需要做FMO对照吗？谢谢