抗体孵育

niwanmao

lin850424 发表于 2014-3-22 09:34
哦，哦，好的，谢谢倪老师，那姗姗写的加之前还离心是为什么啊？

那个离心包括两种，一种是混合抗体前离心，使管壁上的抗体都下来，瞬时离心，使其充分混合；另一种是抗体平均加到各个管子，再加入标本后，如果发现管壁上有粘附的标本或抗体，最好也瞬时离心一下，保证抗体和标本能充分接触。

瞬时离心：按照我的体会使离心机加速到800转/分，马上停止即可。

珊珊

lin850424 发表于 2014-3-22 09:34
哦，哦，好的，谢谢倪老师，那姗姗写的加之前还离心是为什么啊？

离心就是让所有粘附在管壁上的液体都甩到底部，这样可以避免浪费，以及各种抗体混合均匀。

lin850424

niwanmao 发表于 2014-3-16 11:13
如果图被覆盖了就没法追溯了。

如果是抗体没加，从图上可以看的出那个通道很干净；如果是抗体量加少了或 ...

倪老师，我之前做的CD4CD25凋亡48h检测早期一般都是6%左右，图1.但师妹按照我的方法做，48h检测，竟然做出来了26%，图2.但72h检测，反而又称了0.3%，图3，是不是72h抗体没加上啊，但感觉通道又不是很安静！但图2又是怎么回事呢，为什么会这么高？（percp-cy5.5是7-aad，因为没找到7AAD的名字，用percp代替了）

niwanmao

lin850424 发表于 2014-3-29 22:03
倪老师，我之前做的CD4CD25凋亡48h检测早期一般都是6%左右，图1.但师妹按照我的方法做，48h检测，竟然做 ...

图2的细胞为什么这么少？FSC/SSC散点图怎么样的？

lin850424

niwanmao 发表于 2014-3-30 12:33
图2的细胞为什么这么少？FSC/SSC散点图怎么样的？

我截得图都是CD4CD25双阳细胞的凋亡检测图，可能这次收集的细胞量少吧，图二的一开始的散点图是如图的 样子，但是淋巴细胞部分有明显分群呢，之前没有过。

dragonhzqsmmu

lin850424 发表于 2014-3-29 22:03
倪老师，我之前做的CD4CD25凋亡48h检测早期一般都是6%左右，图1.但师妹按照我的方法做，48h检测，竟然做 ...

你图2用等高线图（contour）看看阴性的右侧边界在哪里

可能需要把十字门朝右侧偏移一点了

lin850424

dragonhzqsmmu 发表于 2014-3-30 21:56
你图2用等高线图（contour）看看阴性的右侧边界在哪里

可能需要把十字门朝右侧偏移一点了 ...

细胞量少，用等高图合适吗？看了一下是应该向右移，应该做FMO对照能解决这个问题?

niwanmao

lin850424 发表于 2014-3-30 17:04
我截得图都是CD4CD25双阳细胞的凋亡检测图，可能这次收集的细胞量少吧，图二的一开始的散点图是如图的 样 ...

图2 的FSC/SSC呢？
AV/PI的设门没法用FMO，一般分群都还是清楚的，标准三步设门法参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2186-1-1.html。

lin850424

niwanmao 发表于 2014-3-31 10:11
图2 的FSC/SSC呢？
AV/PI的设门没法用FMO，一般分群都还是清楚的，标准三步设门法参见：http://www.flowc ...

如图，图2即CD4CD25双阳细胞的FSC/SSC

niwanmao

lin850424 发表于 2014-3-31 12:48
如图，图2即CD4CD25双阳细胞的FSC/SSC

我个人意见：
1、图2的细胞获取的太少。
2、AV/PI设门的十字门应该如下所画更好！