Treg检测

钢蛋儿

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美猫秀秀

我也同问，我用的是ebioscience试剂盒，先孵育CD4.25，后面有的说明书说加破膜剂有的说先洗。我就直接加了孵育了半小时，然后专用buffe洗了两遍，未加血清封闭，就直接加了foxp3，孵育时间过半小时。检测的时候老师说细胞都破了，连CD4都没染上。我之前做TH17也是染色不好 但是有CD4。请教下各位。步骤有什么问题。另外 foxp3浓度大家用的是多少？

niwanmao

美猫秀秀 发表于 2014-3-26 23:26
我也同问，我用的是ebioscience试剂盒，先孵育CD4.25，后面有的说明书说加破膜剂有的说先洗。我就直接加了 ...

eBioscience的foxP3试剂盒我也用过，确定破膜效果很差，并且对细胞状态影响很大。
你这里不是foxP3浓度的问题，而是破膜剂要选择好，换一种吧。

ybz

找到了使用相同Treg试剂盒的,固定破膜效果不错，准备去请教~~~~~

美猫秀秀

ybz 发表于 2014-3-27 12:05
找到了使用相同Treg试剂盒的,固定破膜效果不错，准备去请教~~~~~

亲你用的是ebioscience破膜剂盒子吗？

美猫秀秀

niwanmao 发表于 2014-3-27 08:26
eBioscience的foxP3试剂盒我也用过，确定破膜效果很差，并且对细胞状态影响很大。
你这里不是foxP3浓度的 ...

老师你有试过别的牌子吗？我手头上只有ebioscience的。而且我看有的参考书上说破膜剂孵化时间30min-18h不等，不知道你们平时是孵化多久的？

facetodog

破膜固定化液作用5-10小时以上应该效果都很好，我们都过夜作用差不多15小时

niwanmao

美猫秀秀 发表于 2014-3-27 12:40
老师你有试过别的牌子吗？我手头上只有ebioscience的。而且我看有的参考书上说破膜剂孵化时间30min-18h不 ...

我们现在用Beckman的Perfix-nc，做同样是核内的MNDA，免洗，效果很不错，45分钟能够完成整个处理过程。这是第一次发自心声的广告。以前用过caltag（后来被Invitrogen收购）的fix&perm，已经感觉不错了，但现在Perfix-nc让我觉得比fix&Perm更胜一筹。

美猫秀秀

facetodog 发表于 2014-3-27 19:15
破膜固定化液作用5-10小时以上应该效果都很好，我们都过夜作用差不多15小时 ...

核内的貌似不用fixation.您说的是 fix/per吗?

美猫秀秀

niwanmao 发表于 2014-3-27 19:48
我们现在用Beckman的Perfix-nc，做同样是核内的MNDA，免洗，效果很不错，45分钟能够完成整个处理过程。这 ...

我改进下方法再试试看~谢谢您