PBMC的CD25-PE-Cy7 一直标记不上~

hyper

钢蛋儿 发表于 2014-3-21 23:56
还有几个问题，
1、如果固定的话，多聚甲醛1%~4%哪个效果好点？
2、看到课件上说PE最强，适用于弱表达抗原 ...

您好，我在BD Pharmingen部门工作，您的实验问题可能有更好的解决方案。
倪大说得很对，您的PE-Cy7固定那么久应该都降解成PE了，你的CD25信号跑到PE通道了，所以在PE-Cy7通道检测不到。
关于PE最强的说法是针对488和633激光相应常见染料的，如果您的机器有其它激光会有更强的染料选择。比如
355 激光现在有BD有BUV395。
405激光有BV421，比PE还要亮5-10倍，抗固定剂的性能也大大提高。其它5种BV染料大都比PE强，可以实现单激光6色。我们已经在北京帮客户实现了。
所以如果您能找到BD 5激光的机器，您可以做5激光5色，比您现在的方案亮很多，染料也很稳定，且基本不用调补偿，信噪比大大提升。
染料方案如下：BUV395，BV421，FITC，PE，APC。
如果需要我们，请发邮件给我hyper_niu@bd.com

钢蛋儿

hyper 发表于 2014-3-24 20:12
您好，我在BD Pharmingen部门工作，您的实验问题可能有更好的解决方案。
倪大说得很对，您的PE-Cy7固定那 ...

谢谢……流式细胞仪是老大难 几个有流仪的科都得预约，人的标本又比较随机。我想问下隔一天的话需要固定吗？会不会多聚甲醛4%太浓把标志都破坏了啊？

hyper

我们会了解更多仪器信息，也经常帮大家联系一些比较空闲的机器，不知道您在哪个城市，我们相应的人员可以帮您联系。

倪大的建议比较好，您可以降到1%。不过病人样本多珍贵啊，与其讨论固定的风险控制，不如我们尽量帮您实现当天测，不是更好吗？

钢蛋儿

hyper 发表于 2014-3-24 21:15
我们会了解更多仪器信息，也经常帮大家联系一些比较空闲的机器，不知道您在哪个城市，我们相应的人员可以帮 ...

是的 把献血者的标本做的一团糟 我的良心受到了极大的谴责……您的建议我会考虑的，谢谢

hyper

邮件联系我吧，祝您尽快做出好数据。

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2014-3-21 19:37
固定几周还能检测到对于那些稳定的荧光素可能还可以，但对于PE－cy7这种串联染料就肯定不行。再加上CD25 ...

倪大大，想问下，我FOXp3是PE标记的，CD25是PE-cy7标记的，我下次把CD25换成PerCP-Cy5.5标记的会不会好一些？两种串联染料PE-cy7和PerCP-Cy5.5哪种更稳定呢？

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2014-10-25 23:27
倪大大，想问下，我FOXp3是PE标记的，CD25是PE-cy7标记的，我下次把CD25换成PerCP-Cy5.5标记的会不会好一 ...

两种串联染料都属于不稳定的，但一般使用没问题，如果过几天那我觉得不行。

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2014-10-26 20:22
两种串联染料都属于不稳定的，但一般使用没问题，如果过几天那我觉得不行。 ...

好的 谢谢老师