鱼类多倍体检测（DNA含量），十万火急！

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-17 07:26
用buffer做标本保存液没有试过。

倪老师，这些参数我这么设置，正确吗？为了能直接得到数值，判断倍性，第三个图的M1、M1是这么设置的吗？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-4-17 21:38
倪老师，这些参数我这么设置，正确吗？为了能直接得到数值，判断倍性，第三个图的M1、M1是这么设置的吗？ ...

你的机器上安装了Modfit，为什么不用Modfit来分析？

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-17 21:47
你的机器上安装了Modfit，为什么不用Modfit来分析？

做这个实验，主要有两个目的，首先是定性，通过不同个体的DNA含量，来确定倍性，直接从结果上就可以一眼看出来；其次是定量，通过与鸡红细胞的比值来测定。定性的话，是不是直接从结果上可以看了？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-4-17 22:05
做这个实验，主要有两个目的，首先是定性，通过不同个体的DNA含量，来确定倍性，直接从结果上就可以一眼看 ...

既然又要定性，又要定量，为什么不直接用modfit分析呢？
如果你要定性，首先需要用鸡红细胞确定单倍体位置，然后根据如下图片这样，从荧光强度判断其倍体类型：

确定倍体

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-17 22:29
既然又要定性，又要定量，为什么不直接用modfit分析呢？
如果你要定性，首先需要用鸡红细胞确定单倍体位 ...

定性不需要鸡红细胞，鸡是二倍体吧。我现在手里的鱼里面有二倍体和三倍体的，而且我有确定是正常二倍体的鱼，我以它作为参照就可以了。现在当务之急是先定性，后面定量的时候，再用Modfit分析。
Threshold、Compensation和Detectors/Amps这几个参数设置的正确吗？Histogram Statistics是否要通过直方图里面设置M1、M2才能显示出来？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-04-17 22:59:03

                               
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定性不需要鸡红细胞，鸡是二倍体吧。我现在手里的鱼里面有二倍体和三倍体的，而且我有确定是正常二倍体的

用已知二倍体可以的。FL2-W的AMP可以稍微调高一点

cccssszzz08

niwanmao 发表于 2014-4-14 13:16
鱼类没做过，根据你的描述，鱼类应该都是有核红，但是你即使经过洗涤，其中的白细胞应该还是不少的。
不 ...

这个实验我原来好像见人做过，也是做鱼的。参比用的是小公鸡的红细胞，好像有国标作为依据的。

jordanping23

cccssszzz08 发表于 2014-4-19 08:47
这个实验我原来好像见人做过，也是做鱼的。参比用的是小公鸡的红细胞，好像有国标作为依据的。 ...

国标的资料你有吗？

cccssszzz08

jordanping23 发表于 2014-4-20 20:08
国标的资料你有吗？

这个还真没有，原来是别的实验室做本科设计的一个师弟过来坐流式的时候我见过一次。我可以帮你打听一下，不过那个师弟早就毕业了，我稍微问问他们实验室的人吧。

jordanping23

cccssszzz08 发表于 2014-4-20 20:50
这个还真没有，原来是别的实验室做本科设计的一个师弟过来坐流式的时候我见过一次。我可以帮你打听一下， ...