鱼类多倍体检测（DNA含量），十万火急！

jordanping23

热心人真多！

jordanping23

谁帮我看看，这个RCS值超过了正常的（0.8-5.0），原因是什么？这样的结果可以吗？

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-17 21:47
你的机器上安装了Modfit，为什么不用Modfit来分析？

倪老师，两个主峰中间为什么会有一个小峰？我这个是单个个体的血液做的，没有混合其他细胞。拟合参数（RCS）也超过正常值了，不知道为什么？

jordanping23

jordanping23 发表于 2014-4-26 22:00
倪老师，两个主峰中间为什么会有一个小峰？我这个是单个个体的血液做的，没有混合其他细胞。拟合参数（R ...

我把今天做的流式结果上传了，能否帮我看一下是否有问题？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-4-26 22:02
我把今天做的流式结果上传了，能否帮我看一下是否有问题？

同时回复你上述三个问题。
经过反复查看你在这个帖子以及另一个帖中（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3001-1-1.html）的回复，我发现你应该这么做：
1、圈门应该如下图这样圈，因为其它都是粘连体。
2、在获取的时候，调高FL2-A的Amp，使G2:G1尽量接近2.0。你这两批数据的G2:G1都接近1.4，已经超过Modfit允许的1.5～2.5范围了，所以无法达到正确拟合。估计你只能通过Cellquest自己手动圈比例了。
3、你前面问的RCS偏大，就是因为没圈对R2的缘故。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-27 19:29
同时回复你上述三个问题。
经过反复查看你在这个帖子以及另一个帖中（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread ...

1、关于鸡红细胞按照的问题，有内参和外参两种说法，不一定非得内参。另外，根据已知的鸡红细胞和本实验鱼的DNA含量来看，两个基本相同，做内参的话，重叠在一起，无法区分。比如用两管样品，第一管为参照，第二管为待测样品，事后通过软件分析，同样可以得出结论，你说呢？

2、您说的R2门的问题，很有道理，这篇文献有详细的描述（https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=NTYzOXwzNTlkMWViMHwxNzQwNDc0NzkzfDB8），感觉不错，给大家也分享一下。可是，我基本把细胞调整在200的位置，不管是FL2-A还是FL2-W。另外如果按照您这样的设门，软件得不出你这样的结果，只圈这个群的话，只有一个峰了。

3、前面遇到的絮状沉淀的问题已经解决，染色前也进行细胞计数，显微镜下看到的都是完整的单个细胞，偶有粘连体。

4、synchronization 同步化精灵也可以分析吗？和Modfit有什么不同？我用它也分析了一个结果。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-27 19:29
同时回复你上述三个问题。
经过反复查看你在这个帖子以及另一个帖中（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread ...

我的参数是这么设的，是不是哪里设的不对了？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-4-28 00:48
1、关于鸡红细胞按照的问题，有内参和外参两种说法，不一定非得内参。另外，根据已知的鸡红细胞和本实验 ...

1、你要确定倍性，必须要用参照，首先建议用鸡红细胞做倍性参照，而且必须要有一管鸡红细胞＋待测标本的混合物确定倍性，你如果第一管参照、第二管待测，如果PI浓度和细胞密度有点差别，荧光强度马上就改变了，很容易造成不准确。请仔细思考一下。

2、200道一般是使G2和G1分离度比较好的一个设置，但不是绝对的标准，象你这些标本中G2、G1分不好，建议调高FL2-A的Amp Gain。

3、按照我这个设法不是得不出两个峰，而是因为你的G2、G1原来FL2-A的Amp Gain没有调好，造成两个峰靠的太近，所以Modfit无法拟合。

4、同步化精灵也可以拟合，似乎算法上略有不同，但既然你拟合不好，用这个也可以吧。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-28 12:46
1、你要确定倍性，必须要用参照，首先建议用鸡红细胞做倍性参照，而且必须要有一管鸡红细胞＋待测标本的 ...

倪老师，你说的对的，参照的话，肯定在一个管子里一起固定一起染色，那是最准的。刚才坛友小灰有一个很好的想法，说鱼的红细胞是不是不增殖的？所以，应该只有一个峰才对，您认为是否有道理。我查阅了一下文献，鱼类红细胞主要由肾脏、脾脏和肝脏产生，不存在增殖。我今天又做了一个结果，您帮我看看。设门如何设合理一些。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-28 12:46
1、你要确定倍性，必须要用参照，首先建议用鸡红细胞做倍性参照，而且必须要有一管鸡红细胞＋待测标本的 ...

另外，Amp gain 我这么设置的，是否还是有问题？