鱼类多倍体检测（DNA含量），十万火急！

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-4-28 21:39
另外，Amp gain 我这么设置的，是否还是有问题？

你今天这个结果细胞分群就好的多了，看下来应该是按照单峰的那个图进行设门。不过FL2-A的AMP GAIN建议调到1.1或1.2，稍微高一点看看。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-28 21:48
你今天这个结果细胞分群就好的多了，看下来应该是按照单峰的那个图进行设门。不过FL2-A的AMP GAIN建议调 ...

您说的单峰那个图指的是R1还是R2？另外，我刚才提到的鱼类红细胞不增殖，只有G0/G1期，没有G2期，您是怎么看的？是不是我最终数据处理的时候，应该按照这样才是对的？

RIVA

jordanping23 发表于 2014-4-28 11:47
我的参数是这么设的，是不是哪里设的不对了？

为什么用FL2设阈值呢？

jordanping23

RIVA 发表于 2014-4-29 09:25
为什么用FL2设阈值呢？

我用的是PI染色，如果是7-AAD的话，就是FL-3了。好像是不同的染料要用不同的荧光。。。具体原理我不是很清楚。

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-4-28 22:10
您说的单峰那个图指的是R1还是R2？另外，我刚才提到的鱼类红细胞不增殖，只有G0/G1期，没有G2期，您是怎么 ...

我个人觉得应该就是这幅。因为再上面感觉像是粘连的。没有S期和G2/M期说明这些细胞失去了增殖能力。

RIVA

jordanping23 发表于 2014-4-29 12:46
我用的是PI染色，如果是7-AAD的话，就是FL-3了。好像是不同的染料要用不同的荧光。。。具体原理我不是很 ...

阈值设定不就是为了更好地看目的细胞么？我觉得应该设在FSC或SSC吧

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-29 19:07
我个人觉得应该就是这幅。因为再上面感觉像是粘连的。没有S期和G2/M期说明这些细胞失去了增殖能力。 ...

倪老师，RIVA提到阈值应该设在FSC或者SSC，这方面我不是很清楚，您怎么看？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-5-2 20:08
倪老师，RIVA提到阈值应该设在FSC或者SSC，这方面我不是很清楚，您怎么看？ ...

因为你的FL2阈值设的不大，所以影响不大。没有硬性规定用哪个参数做阈值，根据自己需要灵活选择，但最好不要影响自己的结果分析。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-5-2 21:35
因为你的FL2阈值设的不大，所以影响不大。没有硬性规定用哪个参数做阈值，根据自己需要灵活选择，但最好不 ...

经过无数次的实验摸索，乙醇固定的絮状沉淀问题算是解决了

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-5-2 21:35
因为你的FL2阈值设的不大，所以影响不大。没有硬性规定用哪个参数做阈值，根据自己需要灵活选择，但最好不 ...

倪老师，今天做了一次流式，上机的时候，直方图的两个峰区分的很好，染色前显微镜观察，90%都是单细胞，计数1*10^6个，上机前还用350目的纱布过滤，事后用Modfit软件分析，感觉结果不是很好，能帮我看一下吗？前期问题都解决了，快到终点了，怎么还是有问题，难道是上机参数设置的不对吗？