鱼类多倍体检测（DNA含量），十万火急！

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-5-5 22:23
倪老师，今天做了一次流式，上机的时候，直方图的两个峰区分的很好，染色前显微镜观察，90%都是单细胞， ...

看了下图，获取上的FL2电压还是偏低，但这不是关键所在，关键就是这类细胞似乎又死了，估计你染色过程中的试剂是不是有问题。你得在上机前看看这些细胞状态了。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-5-6 12:55
看了下图，获取上的FL2电压还是偏低，但这不是关键所在，关键就是这类细胞似乎又死了，估计你染色过程中的 ...

细胞死了是什么意思？用70% 酒精固定的时候，已经死了啊。FL2电压，我是调到200道位置，不知为什么在你那显示的这么低，我这边分析不是这样子的。请看图。

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-5-6 13:38
细胞死了是什么意思？用70% 酒精固定的时候，已经死了啊。FL2电压，我是调到200道位置，不知为什么在你 ...

我的意思是这些细胞都碎了，建议你在上机前在显微镜下看看就明白了。
你肯定条件中哪样试剂或者步骤有问题。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-5-6 18:31
我的意思是这些细胞都碎了，建议你在上机前在显微镜下看看就明白了。
你肯定条件中哪样试剂或者步骤有问 ...

倪老师，今天用Cycle test plus作了一次，帮我看看怎么样？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-5-7 23:43
倪老师，今天用Cycle test plus作了一次，帮我看看怎么样？

用这个试剂盒做出来就细胞状态非常好了（见下图）。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-5-8 12:28
用这个试剂盒做出来就细胞状态非常好了（见下图）。

您用Modfit分析的时候，Gate1和Gate2是先Gate FSC-H，SSC-H散点图，还是Gate FL2-A，FL2-W散点图？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-5-8 17:46
您用Modfit分析的时候，Gate1和Gate2是先Gate FSC-H，SSC-H散点图，还是Gate FL2-A，FL2-W散点图？ ...

当然前者。

didi_zhou

jordanping23 发表于 2014-5-8 17:46
您用Modfit分析的时候，Gate1和Gate2是先Gate FSC-H，SSC-H散点图，还是Gate FL2-A，FL2-W散点图？ ...

目的不是要测倍性么？怎么最后都变成在测周期了？如果是测整倍的变化（2N\4N\8N），你的坐标轴应该用对数。如果你是测DNA含量的变化应该用已知含量的标本来做对照，最好有两个，这时用线性，内参外参都可以，最好有单个的最后加个混合的。最后分析使用平均荧光强度就好了，只用看G0/G1期的平均荧光强度就好。不过成熟红细胞应该已经没增值功能，应该只有一个主峰。另外完全没必要使用Modifit等拟合软件。

jordanping23

didi_zhou 发表于 2014-6-19 18:59
目的不是要测倍性么？怎么最后都变成在测周期了？如果是测整倍的变化（2N\4N\8N），你的坐标轴应该用对数 ...

测倍性和细胞周期是一回事，只不过我们要的东西不一样而已。测倍性和您说的一样，只要看样本和对照的荧光强度是否成倍性的关系就可以判断。另外，您说测整倍的变化，坐标轴为对数？我所知道的，不论细胞周期还是倍性检测，应该都用线性（Lin）才对，不知您所说的对数是什么意思。

virginforest

joprdanping  您好，能分享下您的protocol不 ，我最近也要做鱼类实验，还有 您说的絮状沉淀，可以不要用乙醇固定细胞，改用0.1%的Triton X-100破膜，一样的效果，还省时间。