求助小鼠红细胞裂解后的白细胞分群

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2014-6-3 21:02
你这些细胞的分群是如下图这样的，出现状态差的细胞数量过多，其原因较多：
1、会不会你的裂解液成份有问题 ...

侧向电压可否再高点，FSC阈值能否向右侧来一点？
我之前看到文献一般先是CD45 VS SSC选出白细胞，再CD115 VS CD11B双阳性为单核细胞，最后是CD115 VS LY6C区分小鼠单核细胞的三个亚群
自己也准备在做，希望能有交流

dragonhzqsmmu

33flower 发表于 2014-6-10 21:32
谢谢倪老师。
裂解液用的是BD的。
小鼠血液是眼球摘除取的血，血液存放到临床用的含EDTA的抗凝管，充分混 ...

眼球取血有没有激活血小板导致不完全凝血？
裂解多少时间，从标本处理到上机多少时间？注意4度降低细胞活力了吗？

33flower

ambassador 发表于 2014-6-21 11:32
请问你淋巴细胞和单核细胞后来分开来了吗？能分享下你是怎么将他们很好的分开的吗？

我怀疑是不是FSC、S ...

现在做过来还是差不多，没能很好的分开

33flower

niwanmao 发表于 2014-6-21 14:46
加一个CD45就可以了

CD45刚到，最近拿Live/dead和CD45同时染了裂解后的白细胞。
上图是CD45-SSC图的分布,请问这里几群分别是什么啊？
下图是CD45阳性的活细胞的FSC/SSC散点图。

33flower

dragonhzqsmmu 发表于 2014-6-21 19:05
眼球取血有没有激活血小板导致不完全凝血？
裂解多少时间，从标本处理到上机多少时间？注意4度降低细胞活 ...

不完全凝血没注意，有时候取血到抗凝管还是会发现血凝块，觉得眼球取血时血应该尽量不要碰到周围毛发，让他自然滴到抗凝管会比较好。
裂解一般室温15分钟。
标本做完染色一般就直接上机了，大概1-2小时内吧。
血标本放冰盒里保存直到裂解，一般都是现取现做。

niwanmao

33flower 发表于 2014-7-23 15:30
CD45刚到，最近拿Live/dead和CD45同时染了裂解后的白细胞。
上图是CD45-SSC图的分布,请问这里几群分别是什 ...

各群所代表的细胞如下：

srallod

非常感谢楼上各位。我做眼睑采血也经常出现这样的情况，怀疑是因为不完全凝血造成的。但是每次眼睑取血又经常容易出现凝血的情况，不知道各位有没有什么好的办法.... 谢谢了。

niwanmao

srallod 发表于 2017-3-15 00:33
非常感谢楼上各位。我做眼睑采血也经常出现这样的情况，怀疑是因为不完全凝血造成的。但是每次眼睑取血又经 ...

取血的针筒里面预先吸入抗凝剂试试？？