全血treg

niwanmao

Kimbryant 发表于 2014-7-30 22:47
那这个溶血溶的还行吗？以前有时候溶血分不开群，这次好像分了三群

溶血还可以的。

奇天

niwanmao 发表于 2014-7-30 22:34
所以我说要加CD25。从FSC看，右侧应该是单核细胞，但从CD4的荧光强度看，似乎又像是淋巴细胞。因此，加CD ...

倪老师，我也遇到这问题了
1、到底右侧的那群算是单核细胞还是淋巴细胞呢，查了一下网上对于单核细胞是否表达CD4的探讨，有网友回复“表达，但程度比较低，这也是为什么MACS阳选CD4+T需要先去掉CD14+单核的原因。”
2、单核细胞的假Foxp3阳性是什么原因造成的？是透核膜染色没洗干净，还是单核细胞也会少量表达Foxp3？
3、是不是单纯从细胞直径上无法准确判断淋巴细胞和单核细胞？我觉得不同状态下的淋巴细胞，大小差异是比较大的
4、有位前辈说，CD25表达量很快会降低，两个小时内必须染上色。最近我试了一下，发现CD25先染色后破红细胞比先破红细胞后染色的效果好，应该是先破红细胞使得染色时间推迟了半个小时

niwanmao

奇天 发表于 2016-9-22 17:33
倪老师，我也遇到这问题了
1、到底右侧的那群算是单核细胞还是淋巴细胞呢，查了一下网上对于单核细胞是否 ...

1、通过CD4的强度可以分开。磁珠分选是因为无法通过强度判断，所以只能先去掉。
2、单核细胞一般不会出现foxP3假阳性，除非细胞死亡粘附能力增加。
3、正常情况下大多数可以区分，FSC、SSC无法区分的情况是因为淋巴细胞活化增大，或者提取PBMC时影响了细胞形态造成的，所以最好是加一个CD45或CD14区分。
4、你指的用刺激方式活化淋巴细胞？如果直接测不存在这种问题。

小混战

奇天 发表于 2016-9-22 17:33
倪老师，我也遇到这问题了
1、到底右侧的那群算是单核细胞还是淋巴细胞呢，查了一下网上对于单核细胞是否 ...

您好！您说的最后一步，是指先胞外染色后裂红吗？我是要做刺激培养的话，染色应该加在什么时候啊？

niwanmao

小混战 发表于 2018-2-3 16:55
您好！您说的最后一步，是指先胞外染色后裂红吗？我是要做刺激培养的话，染色应该加在什么时候啊？ ...

刺激后我们这边研究生以前做过，刺激后染色应该没问题啊