我新手做的TREG流式，图怎么看啊

woshishuilz

RIVA 发表于 2014-8-11 13:29
做出的图应该是这样的啊~同型对照一定要做，尤其是CD25的同型对照。

嗯，那如果前面FS/SS里面的细胞圈门是全部都圈上，下面直接CD4/CD25纵横坐标分析，还是在总细胞里圈出淋巴细胞下面分析，我做流式的时候那老师直接全部全上，就跟上面的图一样

niwanmao

woshishuilz 发表于 2014-8-11 10:46
只是做了个CD25同性对照，按时间顺序第一个PE

从你这几个图看，首先，细胞状态很差，都碎了，其次 没染上。

woshishuilz

niwanmao 发表于 2014-8-11 21:06
从你这几个图看，首先，细胞状态很差，都碎了，其次 没染上。

倪老师麻烦看看我做的步骤对不对：
我做了估计有40多管，都跟这个差不多，我是取大鼠尾静脉抽血后做的全血步骤是这样的：
1、尾静脉采血用EDTA-2K管抗凝后立即检测，
2、分5管：空白管，CD25同型，CD25PE,CD4APC,CD4CD25双染。每管50ul全血样本，每管加      
   5ulCD4、CD25抗体(杭州联科)。
3、4度孵育20min后加入1ml红细胞裂解液（碧云天），4度10min。
4、时间到后2400min/5min洗涤2次后，600ul的pbs重悬，过300目筛网上机。

niwanmao

woshishuilz 发表于 2014-8-11 21:16
倪老师麻烦看看我做的步骤对不对：
我做了估计有40多管，都跟这个差不多，我是取大鼠尾静脉抽血后做的全 ...

如果你4度孵育，建议30分钟，此外，红细胞裂解液可以尝试一下自配氯化铵裂解液（配方站内找）。
离心速度改为1500转/分试试，洗涤一次。

woshishuilz

niwanmao 发表于 2014-8-11 21:31
如果你4度孵育，建议30分钟，此外，红细胞裂解液可以尝试一下自配氯化铵裂解液（配方站内找）。
离心速度 ...

那个2400/min。实验室都是通用的，因为那个离心机有点慢，平时传代细胞都用1800/min，我以前试过1200/min，结果细胞都没离下来，还有那个孵育跟裂解红细胞4度和室温有没有区别？

woshishuilz

niwanmao 发表于 2014-8-11 21:31
如果你4度孵育，建议30分钟，此外，红细胞裂解液可以尝试一下自配氯化铵裂解液（配方站内找）。
离心速度 ...

还有那个自配裂解液调ph值，是直接加上还是要用ph仪器检测下调？

niwanmao

woshishuilz 发表于 2014-8-11 22:08
还有那个自配裂解液调ph值，是直接加上还是要用ph仪器检测下调？

以上只是我的建议，总之，细胞新鲜处理时仍出现大量碎片，肯定实验过程中某个环节出了问题，所以需要耐心的一步步去排查。

自配的裂解液可以用Ph试纸，也可以用Ph计，都行。

woshishuilz

niwanmao 发表于 2014-8-11 22:33
以上只是我的建议，总之，细胞新鲜处理时仍出现大量碎片，肯定实验过程中某个环节出了问题，所以需要耐心 ...

谢谢倪老师指导，我明天再买2支抗体，过2天在做试试，

woshishuilz

niwanmao 发表于 2014-8-11 22:33
以上只是我的建议，总之，细胞新鲜处理时仍出现大量碎片，肯定实验过程中某个环节出了问题，所以需要耐心 ...

请问倪老师有没有关于肺泡灌洗液炎性细胞瑞氏染色的形态鉴定方面的知识介绍？

niwanmao

woshishuilz 发表于 2014-8-11 23:14
请问倪老师有没有关于肺泡灌洗液炎性细胞瑞氏染色的形态鉴定方面的知识介绍？ ...

炎症细胞性质鉴定应该流式最拿手啊。