求小鼠脾组织的Th1/Th2/Th17/Treg细胞流式检测试剂

呓er

v2002lichao 发表于 2014-12-4 15:27
双标如何做的Treg?

Treg双标肯定不能做的啊

olesama001

呓er 发表于 2014-12-4 13:49
我做过小鼠脾脏的TH1 TH2 TH17 除了佛波酯 其他都是在eBioscience买的 做出来还不错 荧光用的 直接做的CD4 ...

用CD4就不需要CD8了，但CD3也不用吗，细胞内使用IFNγ、IL-4，IL-17 吗。

olesama001

niwanmao 发表于 2014-11-30 19:30
可以这样搭配，供参考：

Th1/Th2：CD3 FITC、CD8 PerCP、IFNγ APC、IL-4 PE

倪老师，我查看BD公司IFN-γ的说明，上面用法写For optimal immunofluorescent staining with flow cytometric analysis, this anti-cytokine antibody should be
titrated (<_ 0.5μg mAb/million cells). 看不明白，每次需要多少啊

niwanmao

olesama001 发表于 2014-12-7 21:00
倪老师，我查看BD公司IFN-γ的说明，上面用法写For optimal immunofluorescent staining with flow cytom ...

使用10E6细胞进行滴定，滴定的梯度均在0.5ug以内，你需要在这个范围内找到一个最佳的用量。

呓er

olesama001 发表于 2014-12-7 20:56
用CD4就不需要CD8了，但CD3也不用吗，细胞内使用IFNγ、IL-4，IL-17 吗。

Th1不就是CD4+IFN-γ+吗 我个人觉得双标就够了 做好同型对照很重要 对的 胞内的就是偶联荧光的那些抗体 不过IL-17是IL-17A

olesama001

niwanmao 发表于 2014-12-7 21:04
使用10E6细胞进行滴定，滴定的梯度均在0.5ug以内，你需要在这个范围内找到一个最佳的用量。 ...

一般是预实验摸最佳用量吗，一般设几个多大用量的梯度啊，还有预实验时是每种抗体单独试验吗，需要同型对照吗，同型对照的用量也需要摸最佳用量的话是不是还需要排列组合一下

olesama001

呓er 发表于 2014-12-8 10:05
Th1不就是CD4+IFN-γ+吗 我个人觉得双标就够了 做好同型对照很重要 对的 胞内的就是偶联荧光的那些抗体  ...

嗜酸粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和郎罕氏细胞均可表达CD4，不会干扰吗

niwanmao

olesama001 发表于 2014-12-8 10:19
一般是预实验摸最佳用量吗，一般设几个多大用量的梯度啊，还有预实验时是每种抗体单独试验吗，需要同型对 ...

需要用确定阳性表达该标记的细胞进行滴定，一般从最大量开始，对半稀释滴定，找到最佳浓度。
如果你的抗体没法找到阳性细胞，那么建议找相关的文献，看他们的条件进行参照。

olesama001

niwanmao 发表于 2014-12-8 12:31
需要用确定阳性表达该标记的细胞进行滴定，一般从最大量开始，对半稀释滴定，找到最佳浓度。
如果你的抗 ...

有阳性对照，站里有相关的滴定操作方法资料吗

呓er

olesama001 发表于 2014-12-8 10:21
嗜酸粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和郎罕氏细胞均可表达CD4，不会干扰吗

最初圈细胞群时只圈淋巴细胞群 细胞因子那些细胞也能够分泌吗 我不了解了 再查查看吧