CD107分子检测T细胞杀伤功能

gaga1989xl

niwanmao 发表于 2015-1-1 20:18
你可以仔细看看上面的图，排除的一干二净，自发荧光和阳性完全不在一个道上，并且FSC已经分开得差不多了 ...

仔细分析过了，非常感谢您的耐心帮助！不过还想搞明白K562细胞等为什么会表达CD107,以后才能更好的优化实验，希望各位战友多多参与分析！

niwanmao

gaga1989xl 发表于 2015-1-2 00:28
仔细分析过了，非常感谢您的耐心帮助！不过还想搞明白K562细胞等为什么会表达CD107,以后才能更好的优化实 ...

看前面的图了么？K562的CD107b是完全阴性的，只有CD107a非常微弱的表达，其荧光强度之所以稍强，完全是因为培养、颗粒两方面原因造成。既然头是近乎阴性的，并且通过设门能够完全排除开，你为什么还要担心呢？

gaga1989xl

前面您分析的107a和107b单染的K562是为了寻找原因时4度孵育抗体进行检测的，的确是弱阳性，而实验时CD107需要与混合细胞37度培养箱孵育1.5-4小时，附件中的文件1就是K562细胞37度孵育后的检测结果，可以看到它们的确是100%中等以上荧光强度哦{:soso_e117:}这一点不知道怎么解释{:soso_e132:}

wfz

看不懂，太难

王娟

gaga1989xl 发表于 2014-12-31 00:45
倪老师，谢谢您的热心回答，我想请教如何才能圈出正在的淋巴细胞呢？您看一下附件1的结果，是K562细胞与 ...

你好，我想问一下，你在做杀伤的时候淋巴细胞和肿瘤细胞的比例是多少呢？这个比例需要摸索吗？

niwanmao

王娟 发表于 2015-11-12 10:45
你好，我想问一下，你在做杀伤的时候淋巴细胞和肿瘤细胞的比例是多少呢？这个比例需要摸索吗？ ...

需要。

王娟

niwanmao 发表于 2015-11-12 14:46
需要。

大家好，我还想问一下，流式检测CD107的时候，是不是得把CD8抗体和CD107抗体加到培养体系里共孵育，这样的话，培养体系肯定不能用100ul培养吧？如果放到6孔板或者24孔板培养的时候，能不能把两个抗体也同时加进去？这样应该不会对染色有影响吧？还有就是CD107能不能只用CD107a来检测？

niwanmao

王娟 发表于 2015-11-23 14:33
大家好，我还想问一下，流式检测CD107的时候，是不是得把CD8抗体和CD107抗体加到培养体系里共孵育，这样 ...

检测的孵育应该是将培养的细胞洗涤后再染的，不是直接加到培养体系里面的。
CD107可用CD107a，也可以用b

gaga1989xl

王娟 发表于 2015-11-23 14:33
大家好，我还想问一下，流式检测CD107的时候，是不是得把CD8抗体和CD107抗体加到培养体系里共孵育，这样 ...

CD107是需要培养过程中加进去的，我一般用96孔板进行反应，抗体按正常量加，CD8和其他抗体可以在培养结束后再进行孵育。培养过程中还需要加入高尔基体膜转运抑制剂。

王娟

gaga1989xl 发表于 2015-11-28 16:10
CD107是需要培养过程中加进去的，我一般用96孔板进行反应，抗体按正常量加，CD8和其他抗体可以在培养结束 ...

感谢您的回复，我想再请教下，那么CD8是不是也可以在培养的时候加？这样培养几个小时后荧光不会淬灭吗？还有就是一般您进行CD107和CD8检测杀伤的时候，效应细胞和靶细胞的比例是多少，我用的10:1不知是否可以？