流式细胞术疑难解答（二）：背景荧光（非特异性染色）高

zhang4083

niwanmao 发表于 2015-6-4 21:37
这个其实你平时做免疫分型可以有很深的体会的，如果电压合适，只需要一点点补偿就能够调节到位，如果两个 ...

其实，文字我看明白了。主要是下面的图形没看明白。

zhang4083

就是这里，倪老师

niwanmao

zhang4083 发表于 2015-6-5 09:11
就是这里，倪老师

这是BV510和BV570的激发波长和发射波长，可以不用管。

zhang4083

看明白了。底下是发射波长在360和480，以及480和500之间的区别。多谢。

EthanMr

倪老师，您好！关于自发荧光那部分我问题。
1. 在区分自发荧光时，横坐标是GFP我可以理解，但纵坐标为什么是FL-2，而不是FL-3或者别的通道？
2. 为什么右边图中蓝色（AF）框圈的门里就是自发荧光，是什么原理？

niwanmao

EthanMr 发表于 2015-6-8 10:32
倪老师，您好！关于自发荧光那部分我问题。
1. 在区分自发荧光时，横坐标是GFP我可以理解，但纵坐标为什么 ...

1、常见的自发荧光都是发生在FITC和PE通道的，所以只会选择FL1和FL2。
2、AF圈内判断为自发荧光是因为FL2没有加任何标记却发出了光，所以判断为自发荧光。

EthanMr

niwanmao 发表于 2015-6-8 10:48
1、常见的自发荧光都是发生在FITC和PE通道的，所以只会选择FL1和FL2。
2、AF圈内判断为自发荧光是因为FL2 ...

明白了，谢谢倪老师！

zj8237277

倪老师，您好！
对于第4条：这可能由多个因素引起，包括自发荧光增高和其它荧光素的渗漏增大引起？
原因是讲代谢活化，可到最后讲原因可却是自发荧光增高和其它荧光素的渗漏增大引起  。这两都有关系嘛？ 没理解明白。请指教。谢谢！

niwanmao

zj8237277 发表于 2017-8-7 22:19
倪老师，您好！
对于第4条：这可能由多个因素引起，包括自发荧光增高和其它荧光素的渗漏增大引起？
原因是 ...

一些代谢产物（例如NAPDH等）会造成自发荧光增高，所以是引起自发荧光的因素之一，而FMO对照同时最主要反映的是荧光渗漏，所以这个图上FMO的荧光强度增高，可能存在这两种因素。

beiliao

好不错不错不错啊