大鼠th1/th2/th17/treg比例的检测

mylive

@niwanmao,这个如果把il17的通道和ifn－r通道互换一下，出的图型效果是否会更好？

niwanmao

mylive 发表于 2015-4-14 11:47
@niwanmao,这个如果把il17的通道和ifn－r通道互换一下，出的图型效果是否会更好？ ...

你的意思是把IL17荧光改成ALEXA 647？ 还好吧，差不多的，关键还是在操作和抗体用量上。

mylive

niwanmao 发表于 2015-4-14 12:16
你的意思是把IL17荧光改成ALEXA 647？ 还好吧，差不多的，关键还是在操作和抗体用量上。 ...

我做实验的时候发现precp与pe cy7的补偿比较大，il17表达远不如ifn－r的表达，把il17放到647中对于操作来说，是不是更好调节一些？

niwanmao

mylive 发表于 2015-4-14 12:58
我做实验的时候发现precp与pe cy7的补偿比较大，il17表达远不如ifn－r的表达，把il17放到647中对于操作来 ...

是的，percp和pe-cy7的补偿是比较大的，但是你这个方案里面没有percp嘛。

mylive

niwanmao 发表于 2015-4-14 13:00
是的，percp和pe-cy7的补偿是比较大的，但是你这个方案里面没有percp嘛。

他这个实验应该不能选择cd4这个抗体吧？用pma刺激后，用cd4fitc 我从来都没有染上过。

niwanmao

mylive 发表于 2015-4-14 13:02
他这个实验应该不能选择cd4这个抗体吧？用pma刺激后，用cd4fitc 我从来都没有染上过。 ...

尽管别选。

giamay

mylive 发表于 2015-4-14 13:02
他这个实验应该不能选择cd4这个抗体吧？用pma刺激后，用cd4fitc 我从来都没有染上过。 ...

真的吗，这是做流式的老师很推荐的，，那什么CD4抗体比较好。

giamay

niwanmao 发表于 2015-4-14 10:41
确实，@mylive 说到关键了。 @giamay  用CD3和CD8可能更好。

我也看见过这个，但是在倪老师你的另一篇资料中  Th17 检测原理和样品处理方法 中，你有提到  “PMA 对小鼠 CD4的影响很小，所以检测小鼠 Th1/Th2/Th17 时可用 CD4 直接设门”，对于大鼠，请指教。

niwanmao

giamay 发表于 2015-4-17 14:01
我也看见过这个，但是在倪老师你的另一篇资料中  Th17 检测原理和样品处理方法 中，你有提到  “PMA 对小 ...

是不是那个PPT里面？CD4是这样的，PMA通常都会引起CD4降低，所以有些抗体效价不好的话，可能就导致分群不好，因此一般不建议用。如果未刺激前CD4表达很高，还是可以继续用CD4试试的。

culturelily

先用磁珠分选出CD4细胞，再刺激检测，就没什么问题了。
至于FMO，只是用来设门，对于稀有细胞很重要，且必须做FC阻断。
等熟悉了之后，只有FOXP3需要一个FMO，其他的都可以不做这个对照，实在浪费抗体。