流式细胞仪 激光laser 通道 filter Fluorescence 概念

pilihua

chymanhz 发表于 2015-7-8 10:54
你拿到抗体时，你会看到说明书里提到激发光多少波长范围，发射光多少范围。这里提到的激发光波长就是激光器 ...

这个88%的数值我在BD的荧光染料光谱的地方看到了，但是还是不大理解，是否可以理解为激光激发效率，和量子产量有对应关系吗？通常标定488激光的是50mW，那激光经过整形之后，形成一个66X22微米左右的光斑，用于覆盖粒子，当然整形过程激光强度有损失，然后66X22 只有一部分和粒子重合，假设一系列的过程，最后到达细胞的照度是A流明，那是否能说明粒子发射的是A*88%流明？

deaglezp

pilihua 发表于 2021-12-3 16:10
你好，我想问一下，FITC的滤光片为何有的是530/30  有的是525/40 ？可以获得不同的荧光量，那为何不把带 ...

不同厂家、不同机器的选择不一样，但基本上把FITC的发射峰都包括进去了。因为不同荧光素之间的光谱重叠，带宽设计的越宽，接收到其他荧光素的信号就越多，补偿就难调。

deaglezp

pilihua 发表于 2021-12-3 16:13
我们注意到，虽然FITC的主峰是519，但是不管530还是525的滤光片，都是没有把中心波长放在519，这是为什么 ...

不用在意这个数值，这只是带通滤光片的一种表示方式。另外，FITC通道只是这个通道的名字，并不代表只能用FITC染料，和FTIC光谱接近的EGFP、AF488、BB515都可以用这个通道

pilihua

deaglezp 发表于 2021-12-10 16:56
不同厂家、不同机器的选择不一样，但基本上把FITC的发射峰都包括进去了。因为不同荧光素之间的光谱重叠， ...

谢谢解答，那带宽越大，补偿就难调，那带宽越小，获得的荧光信号就越弱，这个有没有能量化的一个度，比如说这个带宽是多少合适，什么决定了这个滤光片的带宽？

pilihua

deaglezp 发表于 2021-12-10 16:59
不用在意这个数值，这只是带通滤光片的一种表示方式。另外，FITC通道只是这个通道的名字，并不代表只能用 ...

说的对，这个不仅仅只是为FITC用的，是否可以这样理解，设计者在设计这个滤光片的时候，是优先考虑了FITC，毕竟产品注册是要求FITC的，而且也属于常用荧光燃料